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海洋细菌活性和膜完整性的流式检测

Assessment of the Bacterial Cell Viability and Membrane Integrity in Marine Bacteria by Flow Cytometry

钟 钟春莲*
卢 卢余盛*
贾 贾力
陈 陈建明

*Contributed equally to this work 发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010349 浏览次数: 6040

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流式细胞术实验手册
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摘要：5-氰基-2,3-二甲苯基四氮唑 (5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride，CTC) 是一种氧化还原染料，本身不带荧光。CTC可以通过活细菌细胞膜，被活细菌还原后，产生红色荧光物质。碘化丙啶 (Propidium iodide，PI) 是一种核酸染料，它不能通过完整的细胞膜，但可以进入死细胞与细胞内的核酸结合，使死细胞带上红色荧光。因此利用流式细胞仪检测细菌CTC和PI的荧光染色情况可以用于判断细菌的活性和细胞膜的完整性。

Keywords: CTC search PI search 流式细胞术 search

材料与试剂

  1. 70 μm细胞过滤器 (Beyogold, catalog number: FSTR040)
  2. 流式管 (BD Falcon, catalog number: BD 352054)
  3. 5-氰基-2,3-二甲苯基四氮唑 (CTC) (Seebio, catalog number: 182066)
  4. 碘化丙啶 (PI) (Solarbio, catalog number: P8080)
  5. PBS (pH = 7.2~7.4, Solarbio, catalog number: P1020)
  6. CTC溶液 (见溶液配方)
  7. PI溶液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 流式细胞仪 (美国BD公司，model: FACS AriaIII) 
  2. 低速离心机 (中科中佳科学仪器公司，model: LX-200)
  3. 小型低温高速离心机 (德国Eppendorf公司，model: 5424R)
  4. -80 °C冰箱 (中国海尔集团，model: DW-86L388)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：钟春莲, 卢余盛, 贾力, 陈建明. (2019). 海洋细菌活性和膜完整性的流式检测. Bio-101: e1010349. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010349.
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How to cite: Zhong, C. L., Lu, Y. S., Jia, L. and Chen, J. M. (2019). Assessment of the Bacterial Cell Viability and Membrane Integrity in Marine Bacteria by Flow Cytometry. Bio-101: e1010349. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010349.
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分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

微生物学 > 微生物生物膜 > 生物膜培养

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