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海洋微生物中DNA含量的流式检测

DNA Content Analysis in Marine Microorganisms by Flow Cytometry

钟 钟春莲*
卢 卢余盛*
贾 贾力
陈 陈建明

*Contributed equally to this work 发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010348 浏览次数: 4061

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流式细胞术实验手册
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摘要：海洋微生物是海洋生物重要组成部分，因其多样性增加了海洋微生物DNA检测的难度。我们采用流式细胞术 (Flow cytomertry method, FCM)，利用碘化丙啶 (Propidium iodide，PI) 荧光染料与细胞内DNA碱基的结合，可对海洋微生物DNA含量进行快速、准确的检测。

Keywords: 海洋微生物 search 流式细胞术 search DNA含量 search

材料与试剂

  1. 70 μm细胞过滤器 (Beyogold, catalog number: FSTR040)
  2. 流式管 (BD Falcon, catalog number: BD 352054)
  3. 蛋白酶K (Solarbio, catalog number: P9460)
  4. 碘化丙啶 (Signalway Antibody LLC, SAB, catalog number: CA001)
  5. PBS (pH = 7.2~7.4, Solarbio, catalog number: P1020)
  6. 柠檬酸钠 (上海国药，catalog number: 241245)
  7. Triton X-100 (Solarbio, catalog number: T8200-100ml)
  8. 50% 的戊二醛溶液 (Sangon Biotech, catalog number: A500484)
  9. PI (Solarbio, catalog number: P8080)
  10. PI溶液 (见溶液配方)
  11. 1% 柠檬酸钠 (见溶液配方)
  12. 0.1% Triton X-100的PI溶液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 流式细胞仪 (美国BD公司，model: FACSAriaIII)
  2. 低速离心机 (中科中佳科学仪器公司，model: LX-200)
  3. 小型低温高速离心机 (德国Eppendorf公司，model: 5424R)
  4. -80 °C冰箱 (中国海尔集团，model: DW-86L388)
  5. 移液器 (德国Eppendorf公司)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：钟春莲, 卢余盛, 贾力, 陈建明. (2019). 海洋微生物中DNA含量的流式检测. Bio-101: e1010348. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010348.
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How to cite: Zhong, C. L., Lu, Y. S., Jia, L. and Chen, J. M. (2019). DNA Content Analysis in Marine Microorganisms by Flow Cytometry. Bio-101: e1010348. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010348.
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分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

分子生物学 > DNA > DNA 检测

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