材料与试剂

1. 5 ml 流式管
2. 可放置5 ml流式管的试管架2~3个
3. 解剖工具和烧杯
4. 六孔板
5. 枪尖若干：2 µl、20 µl、100 µl、200 µl 和 1 ml 
6. 40 μm过滤筛
7. 15 ml离心管
8. 1 ml带针注射器
9. 96孔U型底板
10. 小鼠 (C57BL/6小鼠，雌雄不限，8周以上，1只)
11. 待滴定的流式抗体 (本文以Anti-Hμman/Mouse CD45R (B220) Alexa Fluor 700为例，eBioscience，catalog number: 56-0452-82)
12. 2% 新生牛血清
13. DNase I (Worthington，catalog number: LS002140)
14. FCS
15. PBS 溶液和蒸馏水 (0.22 µm 滤膜过滤)
16. RPMI-1640 (HyClone, catalog number: SH30809.01)
17. 25 mM HEPES pH7.4 (Sigma-Aldrich，catalog number: H3375)
18. EDTA
19. NaN₃
20. R2培养基 (见溶液配方)
21. 组织分离培养基 (见溶液配方)
22. FACS缓冲液 (见溶液配方)
    

仪器设备

1. 10 µl、200 µl、1,000 µl移液枪
2. 台式冷冻离心机 (Thermo，产品型号LEGEND RT+)
3. 细胞颗粒计数仪 (Beckman, 产品型号Coulter Z2)
4. BD FACS 流式细胞仪 (BD，产品型号BD LSRFortessa)，配置 3B-6V-4YG-3R-2UV (表 1)
   
   表1. 流式细胞仪激光器配置信息
   
   

实验步骤