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小鼠骨髓与骨内膜间充质干细胞分析

Flow Cytometry Analysis of Mouse Bone Marrow and Endosteum Mesenchymal Stromal Cells

谢 谢嘉怡
王 王瑨
赵 赵萌

发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010338 浏览次数: 6006

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流式细胞术实验手册
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摘要：骨髓间充质干细胞 (Mesenchymal Stromal Cells，MSCs) 是骨髓中具有自我更新能力，和成骨、成软骨和成脂肪多向分化潜能的成体干细胞。MSC具有在体外形成纤维细胞集落 (CFU-F) 和在体内、外分化为骨、软骨和脂肪细胞的能力。本文以小鼠骨髓组织为例，使用5种一抗和1种二抗，介绍在骨髓腔和骨内膜分离、标记MSC的方法，用此法标记的MSCs还可进行细胞周期、凋亡等实验。

Keywords: 小鼠 search 间充质干细胞 search 流式细胞术 search

材料与试剂

  1. 15 ml离心管
  2. 1.5 ml EP管
  3. 70 μm滤膜 (Fisherbrand, catalog number: 22363548)
  4. 小鼠 (C57BL/6J，6~8周龄，雄雌各半)
  5. 胎牛血清 (FBS, Gibco, catalog number: 10100147)
  6. Liberase (Roche, catalog number: 5401020001)
  7. DNase I (Roche, catalog number: 10104159001)
  8. 流式抗体如表1

    表1. 流式抗体


  9. 同型对照抗体如表 2

    表2. 同型对照抗体


  10. 磷酸缓冲液 (10x PBS, Sangon biotech, catalog number: E607016-0500)
  11. 氯化铵 (天津大茂化学，catalog number: 12125-02-9)
  12. 碳酸氢钠 (Sigma-Aldrich, catalog number: S5761，500G)
  13. EDTA粉末 (鼎国，catalog number: LE568)
  14. 7-AAD (Biolegend, catalog number: 420404, 50 µg/ml)
  15. HBSS (Corning, catalog number: 26616008)
  16. MSC消化酶 (见溶液配方)
  17. 磷酸缓冲液 (1x PBS) (见溶液配方)
  18. 红细胞裂解液 (500 ml) (见溶液配方)

仪器设备

  1. 离心机 (Eppendorf, catalog numbers: 5804R, 5424R)
  2. 移液器
  3. 水浴锅
  4. 恒温摇床
  5. 摇床
  6. 流式细胞仪 (Thermo fisher scientific, Attune NxT)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：谢嘉怡, 王瑨, 赵萌. (2019). 小鼠骨髓与骨内膜间充质干细胞分析. Bio-101: e1010338. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010338.
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How to cite: Xie, J. Y., Wang，J. and Zhao, M. (2019). Flow Cytometry Analysis of Mouse Bone Marrow and Endosteum Mesenchymal Stromal Cells. Bio-101: e1010338. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010338.
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分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

干细胞 > 成体干细胞 > 基质细胞

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