研究背景：固有免疫系统主要成员NK细胞能够杀死多种病毒感染细胞，肿瘤细胞，以及参与异基因骨髓移植排斥反应而在免疫防御的过程中扮演着重要角色。NK细胞表面表达大量的活化性和抑制性受体，NK细胞的功能状态取决于这两种受体信号的平衡。目前的研究显示NK细胞以“丢失自我”和“诱导自我”两种模式识别异己，这两种识别方式使得NK细胞打破了活化和抑制信号的平衡进而清除异源细胞。“丢失自我”的识别模式认为正常细胞表面广泛表达MHC-I类分子，它们能够被NK细胞表面的MHC-I类分子依赖的抑制性受体所识别，这种识别介导了强的抑制信号的传递。NK细胞接受的由自身MHC-I类分子识别所传递的抑制信号强于NK细胞表面活化性受体识别所传递的活化信号，因此NK细胞不杀伤正常细胞。当靶细胞上的MHC-I类分子不匹配、表达下降或者丢失时，NK细胞上由MHC-I类分子介导的抑制信号被移除，NK细胞表面活化性受体介导的活化信号占主导地位，NK细胞活化进而杀伤靶细胞。

材料与试剂

1. 镊子
2. 剪刀
3. 60 mm x 15 mm平皿 (Corning, catalog number: 430166)
4. 15 ml离心管 (BD Falcon, catalog number: 352096)
5. 100目滤网
6. 1 ml注射器
7. 注射器活塞
8. 待检测小鼠，一般每组3~5只
9. B6野生型小鼠
10. β2m缺失小鼠
11. 胎牛血清
12. Poly I:C (InvivoGen, catalog number: 31852-29-6)
13. 红细胞裂解液 (eBioscience，catalog number: 00-4333-57)
14. PBS 
15. 1640培养基 (WISENT, catalog number: 350-006-CL)
16. CFSE (eBioscience, catalog number: 65-0850-84)
17. 10 μM CFSE (见溶液配方)
18. 1 μM CFSE (见溶液配方)
    

仪器设备

1. 细胞计数仪
2. 多色流式细胞仪
3. 超净工作台
4. 水浴锅
5. 离心机
   

实验步骤