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小鼠背根神经节细胞类型特异神经元流式分选

Isolation of Cell-Type-Specific Neurons in Mouse Dorsal Root Ganglion by FACS

姜 姜博文
鲍 鲍岚
王 王斌

发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010323 浏览次数: 12452

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流式细胞术实验手册
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摘要：初级感觉神经元是介导躯体感觉传导的一类假单极神经元，包括传递疼痛、痒觉、热、机械感觉、本体感觉以及多种伤害性刺激反应。初级感觉神经元的胞体聚集在一起形成背根神经节 (Dorsal Root Ganglion, DRG)，具有很高的细胞异质性。近年来大规模的单细胞测序技术根据不同的分子标记物和躯体感觉传递功能将初级感觉神经元分为10类 (Li等，2016)。然而，不同细胞类型的初级神经元发挥躯体感觉传递功能的分子调控机制却远未研究清楚。流式细胞分选能够将荧光标记的细胞分选并富集，是研究特异类型细胞功能和分子机制的重要技术。目前，流式分选在肿瘤、免疫和干细胞等领域广泛应用，但在初级感觉神经元中的研究相对较少。本文主要介绍了在Sst-Cre;Ai9-tdTomato小鼠中得到选择性表达Somatostatin这类初级感觉神经元的流式分选方法。

Keywords: 背根神经节神经元 search 细胞类型特异 search 流式分选 search

材料与试剂

  1. 咬骨钳 (WPI，catalog number: 501333)
  2. 系结镊 (苏州六六视觉科技股份有限公司, catalog number: 53320A)
  3. 维纳斯剪 (苏州六六视觉科技股份有限公司, catalog number: 54139B)
  4. 玻璃吹管 (工厂自制)
  5. 15 ml离心管 (Corning, catalog number: 430790)
  6. 玻璃底皿 (Cellvis, catalog number: D29-20-1-N)
  7. 盖玻片
  8. 细胞滤网
  9. Sst-Cre;Ai9-tdTomato 成年小鼠 (由Sst-Cre (Jackson Lab品系编号018973) 和Ai9-tdTomato (Jackson Lab品系编号007909) 交配得到)
  10. 胶原酶 (Sigma-Aldrich, catalog number: C9891)
  11. DNA酶I (Sigma-Aldrich, catalog number: DN25)
  12. 胰蛋白酶 (Sigma-Aldrich, catalog number: T8003)
  13. 胎牛血清 (Ausbian, catalog number: VS500T)
  14. 左旋多聚赖氨酸 (PDL) (Sigma-Aldrich, catalog number: P0899)
  15. L-15培养基 (Gibco, catalog number: 11415-056)
  16. DMEM基础培养基 (Gibco, catalog number: 10313-021)
  17. Neurobasal基础培养基 (Gibco, catalog number: 21103-049)
  18. B27 辅助因子 (Gibco, catalog number: 17504-044)
  19. Percoll分离液 (Yeasen, catalog number: 40501ES60)
  20. 双抗 (青链霉素) (Gibco, catalog number: 15070-063)
  21. DAPI (Thermo Fisher, catalog number: D1306)
  22. 无水乙醇
  23. KCl 
  24. KH2PO4
  25. NaCl
  26. Na2HPO4·12H2O
  27. 磷酸缓冲液 (1× PBS) (见溶液配方)
  28. 磷酸缓冲液 (10× PBS) (见溶液配方)
  29. DMEM完全培养基 (见溶液配方)
  30. Neurobasal完全培养基 (见溶液配方)
  31. 10× 背根神经节组织消化液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 流式自动分选仪 (SONY, model: MA900)
  2. 倒置荧光显微镜 (Olympus, model: IX73)
  3. Eppendorf离心机  (Eppendorf, model: 5810R)
  4. 37 °C水浴锅 (常州诺基仪器有限公司，model: HH-420)
  5. 超净工作台
  6. 培养箱

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：姜博文, 鲍岚, 王斌. (2019). 小鼠背根神经节细胞类型特异神经元流式分选. Bio-101: e1010323. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010323.
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How to cite: Jiang, B. W., Bao, L. and Wang, B. (2019). Isolation of Cell-Type-Specific Neurons in Mouse Dorsal Root Ganglion by FACS. Bio-101: e1010323. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010323.
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分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

神经科学 > 发育 > 神经元

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