Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

应用流式细胞技术分选小鼠各级精母细胞的方法

Isolation of Mouse Spermatocytes Using Flow Cytometry

林 林震
陈 陈瑶
张 张玉洁
童 童明汉

发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010320 浏览次数: 7453

返回专辑目录

流式细胞术实验手册
pdf PDF PDF
ask 提问与回复
引用
收藏
被引用
摘要：减数分裂是生物有性生殖的基础，其过程高度复杂且受到严密调控。减数分裂细胞周期可分为I期 (MI，减数第一次分裂) 和II期 (MII，减数第二次分裂)，而MI和MII又可各自划分为前期、中期、后期和末期。其中，MI前期的生物学事件尤为复杂，同源染色体的配对、联会和重组交换均发生在该时期。根据染色质形态，MI前期通常又被划分为细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期。高效地分选减数分裂时期尤其是MI前期各阶段的精母细胞是深入探索减数分裂调控机制的基础。本方案以小鼠为例，提供一种应用流式细胞技术，根据精母细胞的核型 (Hoechst染色) 分选各级精母细胞的方法。本方案获得的各级精母细胞适用于各种常规的生化和分子实验。

Keywords: 小鼠 search 精母细胞 search Hoechst 染色 search 流式细胞技术 search

材料与试剂

  1. CO2安乐死箱
  2. 剪刀
  3. 镊子
  4. 培养皿
  5. 5 ml塑料滴管，15 ml离心管，50 ml离心管，5 ml流式管
  6. 雄性小鼠 (C57/BL6，3周龄及以上)
  7. 胎牛血清 (FBS)
  8. 常规驴血清 (Jackson ImmunoResearch, catalog number: 017-000-121)
  9. 一抗：兔抗SYCP3 (Abcam，catalog number: ab15093，稀释比1:500)，鼠抗γH2AX (Millipore, catalog number: 050636，稀释比1:1000)
  10. 荧光二抗：Alexa Fluor 488抗鼠IgG；Alexa Fluor 594 抗兔IgG
  11. DMEM (Hyclone, catalog number: SH30243.01)
  12. 0.25%胰酶 (Gibco, catalog number: 25200072)
  13. I型胶原酶 (Worthington, catalog number: LS004196)
  14. DNase I (Sigma-Aldrich, catalog number: DN25)
  15. Hoechst 33342 (Sigma-Aldrich, catalog number:14533)
  16. 磷酸盐缓冲液 (1x PBS)
  17. 碘化丙啶 (PI) (碧云天， catalog number: ST511)
  18. Triton X-100 (Sigma-Aldrich, catalog number: T8757-500ML)
  19. 柠檬酸钠 (Sigma-Aldrich, catalog number: S1804-500G)
  20. EDTA (沪试, catalog number: 10009617)
  21. 蔗糖 (沪试, catalog number: 10021418)
  22. NaOH (上海实验试剂有限公司, 174320)
  23. PMSF (Sigma-Aldrich, catalog number: 78830)
  24. DTT (Sigma-Aldrich, catalog number: 43815)
  25. Tris (AMRESCO, catalog number: 0497-500G)
  26. PFA (AMRESCO, catalog number: J531-500G)
  27. Tris-HCl
  28. 硼酸
  29. I型胶原酶溶液 (见溶液配方)
  30. DNase I溶液 (见溶液配方)
  31. Hoechst 33342溶液 (见溶液配方)
  32. 碘化丙啶 (PI) 溶液 (见溶液配方)
  33. 低渗液 (见溶液配方)
  34. 1% PFA (见溶液配方)
  35. 封闭液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 杂交炉 (UVP Hybrilinker Oven)
  2. 流式细胞仪 (BD, model: Aria-II)
  3. 荧光显微镜 (Zeiss，model: Axio Scope.A1)
  4. 水浴锅

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：林震, 陈瑶, 张玉洁, 童明汉. (2019). 应用流式细胞技术分选小鼠各级精母细胞的方法. Bio-101: e1010320. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010320.
ris ris 下载引用格式
How to cite: Lin, Z., Chen, Y., Zhang, Y. J. and Tong, M. H. (2019). Isolation of Mouse Spermatocytes Using Flow Cytometry. Bio-101: e1010320. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010320.
ris ris Download Citation in RIS Format

分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

细胞生物学 > 细胞活力 > 细胞增殖

您对这篇实验方案有问题吗？

在此处发布您的问题，我们将邀请本文作者来回答。同时，我们会将您的问题发布到Bio-protocol Exchange，以便寻求社区成员的帮助。

post 发布问题
0 Q&A