摘要:细胞外囊泡 (extracellular vesicles,EVs) 是指由细胞分泌或者从细胞膜上脱落的脂质双分子层囊泡状小体。根据EVs生物来源、性质及功能通常被分为外泌体 (exosomes)、微囊泡 (Microvesicles/microparticles) 和凋亡小体 (Apoptosis body)。EVs不仅携带母体细胞多种特征性生物信息分子,而且可以将这些分子传递给其他细胞,在许多生理病理学过程中充当生物信息传递载体。因此,对EVs进行准确的定性及定量检测显得尤为重要。流式细胞仪理论上能对EVs进行高通量、快速及多参数的检测,是目前EVs检测的主要手段。本方案以循环微囊泡 (外周血中的微囊泡) 为例,通过电穿孔技术将超小锰磁性近红外量子点 (Ag
2Se@MnQDs) 载入循环微囊泡,利用流式细胞仪对其进行检测。
材料与试剂
- 含EDTA-K2抗凝剂真空采血管 (碧迪公司)
- 电穿孔缓冲液 (北京百奥莱博科技有限公司)
- 蔗糖 (Sigma-Aldrich)
- 盐酸
- 磷酸盐缓冲液(1× PBS) (见溶液配方)
- NaOH (0.1 M) 溶液 (见溶液配方)
仪器设备
- 台式离心机 (Eppendorf, model: Centrifuge 5810R)
- 超高速离心机 (Beckman coulter, model: Avanti J-26 XP)
- 流式细胞仪 (BD, model: FACS AriaⅢ)
- 电穿孔仪 (Bio-Rad, model: Gene Pulser XcellTM Bio-Rad)
软件
- FlowJo软件
实验步骤
Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
分类
细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术
微生物学 > 微生物细胞生物学 > 基于细胞的分析方法
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