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小鼠类肝前体细胞的流式分析与分选

Fluorescence Activated Cell Sorting of Mouse Hepatic Progenitor-like Cells

崔 崔磊
李 李露

发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010308 浏览次数: 8666

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流式细胞术实验手册
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摘要：小鼠肝脏器官在受到胆汁淤积性肝损伤过程中，部分肝细胞会去分化为类肝前体细胞，开始表达肝前体细胞相关的蛋白SOX9。经典的肝脏灌流实验可获得纯度超高的小鼠原代肝细胞悬液。为获得类肝前体细胞，我们利用的是转基因小鼠Sox9-EGFP。由于该小鼠的Sox9基因的启动子后插入EGFP，因此EGFP表达即可指示SOX9蛋白的表达。通过流式分选GFP阳性的原代肝细胞，即可获得类肝前体细胞。

Keywords: 小鼠 search 类肝前体细胞 search 流式分选 search

材料与试剂

  1. 注射器 (康德莱)
  2. 输液器 (康利医疗, catalog number: CE0123)
  3. 一次性静脉留置针 (普益医疗，catalog number: CE0197)
  4. 无菌棉棒、无菌镊子及剪刀
  5. Sterile cell strainer nylon mesh 70 μM (BD, catalog number: 352350)
  6. 培养皿6 cm Dish (Corning, catalog number: 430167)
  7. 小鼠：Sox9-EGFP小鼠 (MMRRC, catalog number: 011019-UCD)
  8. Collagenase IV (Invitrogen, catalog number: 17104019)
  9. FBS (Invitrogen, catalog number: 10099141C)
  10. 70%乙醇
  11. 浓盐酸
  12. 氢氧化钠
  13. 三溴乙醇
  14. 叔戊醇
  15. NaCl
  16. Na3PO4∙12H2O
  17. KCl
  18. D-Glucose
  19. NaH2PO4∙2H2O
  20. CaCl2
  21. MgSO4∙7H2O
  22. EGTA (国药集团)
  23. HEPES (Solarbio)
  24. High glucose DMEM with glutamine (Gibco)
  25. DDC (3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine) (Sigma-Aldrich, catalog number: 137030，0.1% DDC饲料在上海普路腾生物科技有限公司合成)
  26. 1x PBS (Invitrogen, catalog number: c10010500bt)
  27. 10x EBSS without Ca2+ and Mg2+溶液 (见溶液配方)
  28. 10x EBSS with Ca2+ and Mg2+溶液 (见溶液配方)
  29. 溶液I (见溶液配方)
  30. 溶液II (见溶液配方)
  31. 溶液III (见溶液配方)
  32. 小鼠麻醉剂 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 蠕动泵 (Longerpump, model: BT3002J) 
  2. 恒温水浴锅
  3. 离心机 (Eppendorf, model: centrifuge 5810R)
  4. 高速流式细胞分选仪-Aria Sorp (FACS Aria SORP)
  5. 水浴锅

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：崔磊, 李露. (2019). 小鼠类肝前体细胞的流式分析与分选. Bio-101: e1010308. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010308.
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How to cite: Cui, L. and Li, L. (2019). Fluorescence Activated Cell Sorting of Mouse Hepatic Progenitor-like Cells. Bio-101: e1010308. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010308.
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分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

生物化学 > 蛋白质 > 表达

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