摘要:主要介绍如何收集果蝇胚胎,并对胚胎进行漂洗灭菌,然后置于含抗生素的果蝇食物上进行无菌培养,以获得无菌果蝇,用于需要排除细菌干扰的实验。
材料与试剂
- 1.5 ml离心管
- 果蝇培养瓶 (Genesee Scientific, catalog number: 32-130)
- Kimwipes纸巾 (Kimberly-Clark Worldwide, Inc., catalog number: 34155)
- 果蝇胚胎收集笼 (Genesee Scientific, catalog number: 59-101)
- 100 μm细胞滤网筛 (Corning Incorporated-Life Sciences, catalog number: 352360)
- 博格利诺勾线笔
- 50只雄果蝇和50只雌果蝇
- PCR引物 (真细菌的通用引物27F和1492R)
27F:5‘-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’
1492R:5‘-GGYTACCTTGTTACGACTT-3’ - 高糖型马利活性干酵母 (英联马利(北京)食品销售有限公司)
- 84消毒液 (江苏爱特福84股份有限公司)
- Ampicillin sodium (生工生物工程(上海)股份有限公司,catalog number: A610028)
- Tetracyclinehydrochloride (生工生物工程(上海)股份有限公司,catalog number: A600504)
- Rifamycin (生工生物工程(上海)股份有限公司,catalog number: A600808)
- PCR试剂 (上海翊圣生物科技有限公司,catalog number: 10102ES08)
- LB肉汤培养基 (生工生物工程(上海)股份有限公司,catalog number: A507002)
- Agar A (生工生物工程(上海)股份有限公司,catalog number: A600010)
- 蔗糖 (上海实验试剂有限公司)
- 麦芽糖 (上海实验试剂有限公司)
- 苯甲酸钠 (国药集团化学试剂有限公司,catalog number: 30164817)
- 对羟基苯甲酸甲酯 (国药集团化学试剂有限公司,catalog number: 30119426)
- 丙酸 (国药集团化学试剂有限公司,catalog number: 81011918)
- 95%乙醇 (国药集团化学试剂有限公司,catalog number: 10009164)
- 琼脂粉 (生工生物工程(上海)股份有限公司,catalog number: A505255)
- 玉米粉 (上海仕林生物科技有限公司)
- 黄豆粉 (上海仕林生物科技有限公司)
- 食物平板 (见溶液配方)
- 酵母泥 (见溶液配方)
- 苹果汁板 (见溶液配方)
- 固体平板 (见溶液配方)
- 抗生素食物 (见溶液配方)
仪器设备
- 果蝇培养箱 (Percival Scientific, Inc., model: DR-41VL)
- 离心机 (Eppendorf)
- 生物安全柜 (苏州净化,catalog number: SW-CJ-1D)
- PCR仪 (BIO-RAD,model: T100TMThermal Cycler)
- 电饭锅 (上海元山电器工业有限公司,model: YS-RC20B08S)
- 电泳槽 (BIO-RAD,catalog number: 170-4469)
- 电泳电源 (BIO-RAD,catalog number:164-5052)
- 凝胶成像仪 (Proteinsimple,model: SA-1000 [Red])
- 立式压力蒸汽灭菌器 (上海申安医疗器械厂,model: LDZH-200KBS)
实验步骤
Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
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