Immunofluorescent Staining of Drosophila Testis

材料与试剂

一、实验材料

1. 实验器具
   1)

   玻璃器皿
   量筒：1,000 ml，100 ml，50 ml
   蓝盖瓶：1,000 ml，250 ml，100 ml
   
   2)

   一次性耗材
   1.5 ml EP管
   50 ml离心管
   一次性枪头：1,000 μl，200 μl，100 μl，10 μl
   
   3)

   多道计时器
   4)

   解剖器具
   解剖用塑料培养皿 (直径30 mm)
   
   5)

   载玻片：25 × 75 mm，厚度1.0 mm (CITOGLAS, REF1A5101)
   6)

   盖玻片：18 × 18 mm
   
   

二、实验对象

1. 雄果蝇
   
   

三、试剂与溶液

1. HEPES (Sigma) 
2. NaOH
3. 1× PBS (HyClone)
4. Triton X-100 (Amresco)
5. 多聚甲醛 (PFA) (Sigma)
6. 牛血清蛋白 (BSA) (Sigma)
7. 叠氮化钠 (Amresco)
8. 甘油 (Amresco)
9. DAPI (Beyotime)
10. 一抗
11. 荧光标记的二抗 (Jackson ImmunoResearch)
12. PBT (1× PBS + 0.1% Trition X-100) (见溶液配方)
13. 10%多聚甲醛 (PFA) (见溶液配方)
14. 1 M HEPES (见溶液配方)
15. 3%牛血清蛋白 (BSA) (见溶液配方)
16. 70%甘油 (GD) (见溶液配方)
17. 10%叠氮化钠 (见溶液配方)
18. 一抗工作液 (见溶液配方)
19. 二抗工作液 (见溶液配方)
    

仪器设备

1. 镊子：DUMONT #5两把
2. MilliQ纯水仪 (Millipore)
3. 数显恒温水浴锅 (江苏金坛市亿通电子有限公司)
4. 医用低温保存箱-20 °C (海尔)
5. 医用冷藏箱4 °C (海尔)
6. 高压蒸汽灭菌器 (青岛胜方分析仪器有限公司，model: YXQ-LS-50SII)
7. 电子秤 (YUEPING)
8. pH计 (SANXIN, model: MP512)
9. 移液器2/10/200/1,000 μl (Eppendorf)
10. 体式显微镜及冷光源 (AmScoPe, model: LG-150)
11. 斜摇床 (Kylin-Bell, model: TS-8)
12. 激光扫描共聚焦显微镜 (Zeiss, model: 780)
    

实验步骤