Whole Cell Recordings of l-LNv Cells in Adult Drosophila Brain

材料与试剂

一、果蝇品系

1. PDF-Gal4/+; UAS-mCD8-GFP/+
   注：PDF-Gal4/+; UAS-mCD8-GFP/+由pdf-Gal4与UAS-mCD8::GFP杂交得到。
2. pdf-Gal4 (Bloomington Stock Center，BL-6900，此株pdf-GAL4位于2号染色体)
3. UAS-mCD8::GFP (Bloomington Stock Center，BL-5130，此株UAS-mCD8::GFP位于3号染色体)
   
   

二、体外离体解剖

1. 1× PBS (Sangon Biotech, catalog number: E607008)
2. 木瓜蛋白酶悬浮液 (Diamond, catalog number: A003124)
3. L-半胱氨酸 (BBI Life Science, catalog number: CB0132)
   
   

三、电生理试剂

1. 氯化钠 (NaCl) (Sigma-Aldrich, catalog number: 746398)
2. 氯化钾 (KCl) (Sigma-Aldrich, catalog number: P4504)
3. 二水氯化钙 (CaCl₂·2H₂O) (Sangon Biotech, catalog number: C0556)
4. 六水氯化镁 (MgCl₂·6H₂O) (Sangon Biotech, catalog number: C0288)
5. TES (Sigma-Aldrich, catalog number: T1375)
6. 葡萄糖 (Glucose) (Sigma-Aldrich, catalog number: G8270)
7. 海藻糖 (Trehalose) (BBI Life Science, catalog number: TB0919)
8. 蔗糖 (Sucrose) (Sigma-Aldrich, catalog number: S1888)
9. 碳酸氢钠 (NaHCO₃) (Sigma-Aldrich, catalog number: S5761)
10. 磷酸二氢钠 (NaH₂PO₄) (Sangon Biotech, catalog number: S0571)
11. HEPES (Sigma-Aldrich, catalog number: H3375)
12. 葡萄糖酸钾 (K-gluconate) (Sigma-Aldrich, catalog number: G4500)
13. EGTA (Sangon Biotech, catalog number: E0732)
14. Mg-ATP (Sigma-Aldrich, catalog number: A9187)
15. Na₃GTP (Sigma-Aldrich, catalog number: G8877)
16. 组织消化液 (见溶液配方)
17. 细胞外液与电极内液 (见溶液配方)

仪器设备

1. 水平拉制仪 (Sutter Instrument, model: P-97)
2. 玻璃毛细管 (Sutter Instrument, model: BF120-69-15)
3. 光照培养箱 (宁波海曙赛福实验仪器厂)
4. 显微解剖台 (尼康)
5. 生物专用直头镊子 (中镜科仪，model：EP525)
6. 直立显微镜 (Olympus, model: X51)
7. 微操纵器 (Sutter Instrument, model: SD-MX760)
8. 放大器 (Molecular Devices, model: Axopatch200B)
9. 数字化仪 (Molecular Devices, model: Digidata 1320A)
10. 空气台和法拉第笼 (Sutter Instrument, model: AT-3036)
11. 蠕动泵系统 (Cole-Parmer, catalog number: EW-77910-20)
12. 记录槽
13. 铂金丝网
14. 汞灯
    

软件

1. pClamp软件套件 (最低版本8.2)：Minianalysis program (Synaptosoft) 软件

实验步骤