果蝇成虫复眼免疫电镜样品的制备及观察

田垚; 韩俊海

doi:10.21769/BioProtoc.1010279

Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

果蝇成虫复眼免疫电镜样品的制备及观察

Preparation and Observation of Immunogold Electron Microscopic Samples of Adult Fly Compound Eye

田田垚

韩韩俊海

发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010279 浏览次数: 4165

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摘要：免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性和电子显微镜的高分辨率相结合的在亚细胞和超微结构水平上对抗原进行定位分析的一种高精确度、灵敏的技术。本文将介绍用电子致密物质胶体金等标记抗体，然后让其与含有相应抗原的果蝇成虫复眼标本反应，以适宜电镜观察的方法处理该果蝇成虫复眼标本，观察时可见电子致密物质的所在位置，以在超微结构水平上识别抗原、抗体在果蝇成虫复眼的反应部位的免疫电镜方法。

Keywords: 免疫电镜

材料与试剂

鹰牌单面保安刀片 (上海吉列有限公司)
Petri dish
砂纸
Parafilm封口膜 (PM996)
包埋板，30孔金字塔型包埋板 (进口) (中镜科仪，GP10585)
废液瓶
果蝇
502胶
超纯水
Tris-HCl缓冲液
无水乙醇 (上海生物工程股份有限公司，catalog number: A500737-0500)
磷酸钠 (江苏永华精细化学品有限公司，HG/T 3493-2000)
LR White树脂 (进口) (中镜科仪，GS02646)
多聚甲醛 (Paraformaldehyde) (Sigma, catalog number: A500737-0500158127)
戊二醛 (Glutaraldehyde solution) (Sigma, catalog number: G7651)
Na₃PO₄
胶体金交联的抗鼠, Anti-Mouse IgG (whole molecule)-Gold antibody produced in goat，IgG (Sigma, catalog number: G7527)
氢氧化钠 (汕头市西腾化工厂有限公司，CAS: 310-73-2)
柠檬酸铅 (进口) (中镜科仪，GA: 10701) (见溶液配方)
醋酸双氧铀 (进口) (中镜科仪，catalog number: GS02624)
山羊血清 (NGS, Sigma)
BSA (上海生物工程股份有限公司，catalog number: A600332-0100)
Tween 20 (上海生物工程股份有限公司，catalog number: A600560-0500)
Tris (上海生物工程股份有限公司，catalog number: A600194-0500)
氯化钠 (Sigma-Aldrich, catalog number: 746398)
叠氮化钠 (Sigma-Aldrich, catalog number: S8032)
固定液 (见溶液配方)
封闭液 (见溶液配方)
1%柠檬酸铅染液 (见溶液配方)
2%醋酸双氧铀染液 (见溶液配方)

仪器设备

高精细弯锯齿头镊子 (中镜科仪，EP5729)
200目方孔镍网 (进口) (中镜科仪，AP200N)
切片机 (Leica-UC7)
电镜 (Hitachi-7650)
体视显微镜 (Nikon SMZ645)

实验步骤

引用格式：田垚, 韩俊海. (2019). 果蝇成虫复眼免疫电镜样品的制备及观察. Bio-101: e1010279. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010279.

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How to cite: Tian, Y. and Han, J. H. (2019). Preparation and Observation of Immunogold Electron Microscopic Samples of Adult Fly Compound Eye. Bio-101: e1010279. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010279.

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