果蝇幼虫大脑的免疫荧光染色与观察

丛飞; 鲍红村; 徐骁; 杨小杭; 戈万忠

doi:10.21769/BioProtoc.1010278

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果蝇幼虫大脑的免疫荧光染色与观察

Immunofluorescent Staining of Drosophila Larval Brain

发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010278 浏览次数: 6170

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摘要：果蝇幼虫大脑是研究干细胞不对称分裂 (Neumuller和Knoblich，2009)、神经细胞发育与功能 (Spindler和Hartenstein，2010)、神经系统环路形成 (Perry等，2017) 等众多神经发育生物学相关问题的理想模型。如何能够识别脑部不同细胞类型，区分脑部不同功能区域，标记感兴趣的蛋白在大脑中的定位是开展脑内研究的重要步骤。本实验将通过免疫学基本原理，利用一抗定位抗原，之后加入荧光二抗进行标记及信号放大，进而能在共聚焦显微镜下观察到一种或多种荧光信号，实现对感兴趣的蛋白或组织在脑部的特异性标记。本实验需2~3天完成，适用于观察各个阶段的果蝇幼虫大脑。

Keywords: 果蝇

大脑

免疫荧光染色

材料与试剂

牙签
透明指甲油
锡箔纸
海绵或纸巾
口罩
1.5 ml EP管
50 ml离心管
1 ml无菌注射器
0.22 μm过滤器 (Millipore)
载玻片 (Fisher Scientific, catalog number: 12-550-15)
盖玻片 (18 × 18 mm, Fisher Scientific, catalog number: 12-542A)
玻璃皿或三孔解剖皿 (Fisher Scientific, catalog number: 21-379)
果蝇幼虫
中性树脂 (国药化学试剂, catalog number: 10004160)
一抗 (根据实验所需)
荧光二抗 (根据实验所需)
TO-PRO-3 (Invitrogen, catalog number: T3605)
防淬灭剂Vectashield mounting medium (Vector Laboratories, catalog number: H-1000)
胎牛血清Bovine Serum Albumin, BSA (BBI Life Sciences, catalog number: A600332-0100)
昆虫培养液Schneider’s Insect Medium, SD (Sigma, catalog number: S9895-1L)
Triton X-100 (Sigma, catalog number: 9002-93-1)
多聚甲醛 (8% paraformaldehyde; Electron Microscopy Sciences; catalog number: 157-8)
Na₂HPO₄
KH₂PO₄
NaCl
KCl
HCl
PBS溶液 (见溶液配方)
PBT溶液 (见溶液配方)
固定液 (4%多聚甲醛) (见溶液配方)
封闭液 (见溶液配方)
SD溶液 (见溶液配方)

仪器设备

剪刀
精细解剖镊 (Dumont, World Precision Instruments; no.5)
解剖体视镜
水平滚动式摇床
实时激光共聚焦显微镜

实验步骤

引用格式：丛飞, 鲍红村, 徐骁, 杨小杭, 戈万忠. (2019). 果蝇幼虫大脑的免疫荧光染色与观察. Bio-101: e1010278. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010278.

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How to cite: Cong, F., Bao, H. C., Xu, X., Yang, X. H. and Ge, W. Z. (2019). Immunofluorescent Staining of Drosophila Larval Brain. Bio-101: e1010278. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010278.

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