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果蝇肠上皮的免疫荧光染色

Immunofluorescence Staining of Drosophila Intestinal Epithelium

金 金真
袭 袭荣文

发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010270 浏览次数: 7264

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果蝇实验手册
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摘要：利用抗原抗体特异性结合的免疫反应原理，通过不同来源的抗体所带的不同荧光基团为内源蛋白标记上特定的荧光信号，从而可以通过共激光聚焦显微镜同时检测多种蛋白的表达情况。该方法普遍适用于果蝇的各种组织来检测蛋白的表达位置以及表达水平，可用于探究不同基因的表达特性、蛋白与蛋白之间的共定位关系等。本实验以果蝇肠上皮为例，用小鼠来源的抗体标记在肠干细胞中特异表达的膜定位Delta (Dl) 蛋白，并结合内源表达的绿色荧光蛋白 (GFP) 和DNA荧光染料，通过激光扫描共聚焦显微镜同时进行多通道扫描，从而获取两种蛋白与DNA在细胞中的定位信息。

Keywords: 肠上皮 search 免疫荧光染色 search 固定 search 脱水 search Insect medium search 肠干细胞 search

材料与试剂

  1. 移液枪头
  2. 载玻片 (Fan Yi, catalog number: 7105P)
  3. 盖玻片 (DIAMOND, 20 × 20 mm, 0.13-0.17 thick)
  4. 1.5 ml离心管 (Axygen Scientific, catalog number: 07218934)
  5. 0.22 μm滤器 (MILLEX, catalog number: R3MA68255)
  6. 雌性果蝇成虫
  7. 37%多聚甲醛 (Sigma-Aldrich, catalog number: F1635)
  8. 甲醇 (Sigma-Aldrich, catalog number: 061495)
  9. 正庚烷 (国药集团化学试剂有限公司, catalog number: 80066918)
  10. 正常羊血清 (NGS, Cell Signaling Technology, catalog number: 5425)
  11. 一抗：Dl小鼠1:500 (DSHB, catalog number: AB528194) 
  12. 二抗：Alexa-Cy5山羊抗小鼠1:300 (Life Technology)
  13. DNA荧光染料：DAPI (Sigma-Aldrich, catalog number: D9542)
  14. Triton X-100 (Sigma-Aldrich, catalog number: T9248)
  15. 甘油 (Sigma-Aldrich, catalog number: SHBC5602V)
  16. NaHCO3 (北京化工厂)
  17. CaCl2 (北京益利精细化学品有限公司)
  18. NaOH (北京益利精细化学品有限公司)
  19. HCl (国药集团化学试剂有限公司, catalog number: 10011018)
  20. NaCl (北京化工厂)
  21. KCl (北京益利精细化学品有限公司)
  22. Na2HPO4 (北京化工厂)
  23. KH2PO4 (北京益利精细化学品有限公司)
  24. Schncider’s powdered medium (Sigma-Aldrich, catalog number: S9895)
  25. Grace’s Insect Medium (见溶液配方)
  26. 10× PBS (见溶液配方)
  27. 1× PBS (见溶液配方)
  28. PBT (见溶液配方)

仪器设备

  1. 解剖板
  2. 超精细解剖镊子 (WPI, Dumoxel合金镊子，#5 14098)
  3. 体式光学显微镜 (Leica S6E)
  4. 移液器 (GILSON)
  5. 摇床 (Kylin Bell Lab Instruments)
  6. 激光扫描共聚焦荧光显微镜 (Nikon A1或Zeiss LSM800)
  7. 4 °C冰箱

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：金真, 袭荣文. (2019). 果蝇肠上皮的免疫荧光染色. Bio-101: e1010270. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010270.
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How to cite: Jin, Z. and Xi, R. W. (2019). Immunofluorescence Staining of Drosophila Intestinal Epithelium. Bio-101: e1010270. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010270.
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分类

细胞生物学 > 细胞染色

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