Detection of Apoptotic Cells in Drosophila by Anti-Caspase-3 Antibody-based Staining and TUNEL Assay

方法1: 抗Caspase-3抗体染色检测果蝇幼虫翅膀成虫盘中的凋亡细胞

摘要：Caspase-3是Caspase家族的一员，作为效应Caspase在细胞凋亡中发挥作用。果蝇DrICE是Caspase-3的同源基因，序列和功能高度保守。由于该保守特性，虽然抗Caspase-3抗体并非来自果蝇，诸多研究证实它可以用于检测果蝇中的凋亡现象，并已成为检测果蝇凋亡的经典手段之一 (Liu等，2012；Fogarty和Bergmann，2014)。目前已有商业化的抗Caspase-3抗体，为检测提供了方便。
关键词：凋亡，果蝇翅膀成虫盘，抗Caspase-3抗体

材料与试剂

1. 标准级显微镜载载玻片(25 × 75mm，厚度1 mm ± 0.2 mm)
2. 盖玻片(22 × 22 mm)
3. 1.5 ml离心管
4. 移液枪头
5. 果蝇三期幼虫
6. 1× PBS
7. Cleaved Caspase-3 (D175) Rabbit Antibody (Cell Signaling, catalog number: 9661L) (4 °C保存)
8. Alexa Fluor(anti-rabbit) 488 (Cell Signaling, catalog number: 4412S) (4 °C保存)
9. Alexa Fluor(anti-rabbit) 555 (Cell Signaling, catalog number: 4413S) (4 °C保存)
10. 抗荧光淬灭剂 (Beyotime, catalog number: P0128-2) (-20 °C保存)
11. 指甲油
12. 甲醛 (Sigma, catalog number: F8775)
13. Tween-20
14. BSA
15. 羊血清或马血清
16. 0.3% PBST (见溶液配方)
17. 固定液 (3.7%多聚甲醛) (见溶液配方)
18. 封闭液 (见溶液配方)
    注：抗体用封闭液进行稀释。
    

仪器设备

1. 移液枪
2. 解剖镊
3. 解剖皿
4. 解剖镜 (奥林帕斯，model: SZ51-SET)
5. 转移脱色摇床 (奥豪斯，model: TS-8)
6. 正置荧光显微镜 (蔡司，model: Imager Z2)
   

实验步骤