Lineage Tracing in Drosophila Intestinal Stem Cells

材料与试剂

1. 耗材
   
   1)

   1.5 ml离心管
   2)

   移液枪头
2. 果蝇品系
   
   1)

   Su(H)-Gal4 (from Steven Hou lab)
   2)

   u-Flp (BDSC: #4540)
   3)

   Tub-gal80^ts (BDSC: #7017)
   4)

   ttk-RNAi (v10855)/CyO
   5)

   Act [<<]lacZ /MRS (BDSC: #6355)
3. 试剂
   
   1)

   NaCl
   2)

   KCl
   3)

   Na₂HPO₄
   4)

   KH₂PO₄
   5)

   37%甲醛 (Sigma-Aldrich, catalog number: F1635)
   6)

   正庚烷 (国药集团化学试剂有限公司，80066992)
   7)

   甲醇 (Sigma-Aldrich, catalog number: 061495)
   8)

   Triton X-100 (Sigma-Aldrich, catalog number: T9248)
   9)

   NGS (Cell Signaling Technology, catalog number: 5425)
   10)

   甘油 (Sigma-Aldrich, catalog number: T9248)
   11)

   DAPI (Molecular Probe)
   12)

   一抗：小鼠源抗Dl (1:300, DSHB), 小鼠源抗Pros (1:300, DSHB), 兔源抗LacZ (1:300, DSHB)
   13)

   二抗：山羊抗兔Alexa488 (1:300, Molecular Probe), 山羊抗小鼠Alexa56 (1:300, Molecular Probe)
   14)

   1× PBS缓冲液 (见溶液配方)
   15)

   PBT缓冲液 (见溶液配方)
   16)

   Mounting Medium (见溶液配方)

仪器设备

1. 体式显微镜 (Leica S6E)
2. 移液枪 (吉尔森公司)
3. 精细解剖镊 (WPI, Dumoxel合金镊子，#5 14098)
4. 摇床 (杭州米欧仪器有限公司)
5. 激光共聚焦显微镜 (尼康公司，Nikon A1-R)
6. 恒温培养箱 (上海一恒科技有限公司)
   

实验步骤