Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

果蝇雌性生殖干细胞免疫组织化学染色

Immunohistochemistry for Drosophila Female Germline Stem Cells

石 石静远
袭 袭荣文

发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010263 浏览次数: 4878

返回专辑目录

果蝇实验手册
pdf PDF PDF
ask 提问与回复
引用
收藏
被引用
摘要：果蝇的生殖干细胞是研究干细胞调控和微环境作用的重要模型。利用果蝇的生殖干细胞模型，人们首次证明了干细胞的微环境调控学说。而对于果蝇的生殖干细胞，免疫组织化学是主要的研究手段之一。利用抗原抗体的特异性结合特性，将特定蛋白用其特异性抗体 (IgG) 标记，并通过带有荧光基团的抗体结合已标记蛋白上的IgG，可以实现组织中特定蛋白质的标记，从而标记特定表达该蛋白的细胞并用于进一步分析。本文以雌性果蝇的卵巢为对象，通过抗α-Spectrin, Vasa两种抗体，标记原卵区 (germarium)的雌性生殖干细胞和其微环境，以便分析雌性生殖干细胞的干性维持和分化。

Keywords: 果蝇 search 雌性生殖干细胞 search 原卵区 search 微环境 search

材料与试剂

  1. 移液枪头
  2. 2 ml离心管
  3. 载玻片
  4. 盖玻片
  5. 雌性成体果蝇
  6. 指甲油
  7. 37%甲醛 (formaldehyde, Sigma, catalog number: F1635)
  8. NaH2PO4
  9. Na2HPO4
  10. NaCl
  11. 甘油
  12. DABCO (1,4-Diazabicyclo[2,2,2]octane)
  13. TritonTM X-100
  14. 羊血清 (NGS)
  15. 一抗 (特异性结合目标蛋白)：大鼠抗Vasa (DSHB, anti-vasa)，小鼠抗alpha-Spectrin (DSHB, 3A9)
  16. 二抗 (带有荧光基团，特异性结合一抗)：Alexa 568大鼠抗IgG (Molecular Probes)，Alexa 488小鼠抗IgG (Molecular Probes)
  17. DAPI (4’,6’-diamidino-2-phenylindole; Sigma)
  18. 磷酸缓冲液 (1× PBS, pH 7.4) (见溶液配方)
  19. PBT (1×) (见溶液配方)
  20. 封片剂 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 镊子 (WPI®，Dumoxel合金镊子，#5 14098)
  2. 移液器
  3. 解剖板
  4. 解剖显微镜 (Leica L2)
  5. 摇床
  6. 通风橱
  7. 荧光显微镜 (Zeiss Meta 510)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：石静远, 袭荣文. (2019). 果蝇雌性生殖干细胞免疫组织化学染色. Bio-101: e1010263. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010263.
ris ris 下载引用格式
How to cite: Shi, J. Y. and Xi, R. W. (2019). Immunohistochemistry for Drosophila Female Germline Stem Cells. Bio-101: e1010263. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010263.
ris ris Download Citation in RIS Format

分类

细胞生物学 > 细胞染色

您对这篇实验方法有问题吗？

在此处发布您的问题，我们将邀请本文作者来回答。同时，我们会将您的问题发布到Bio-protocol Exchange，以便寻求社区成员的帮助。

post 发布问题
0 Q&A