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果蝇翅成虫盘免疫荧光染色

Immunofluorescence Staining in Drosophila Wing Imaginal Discs

高 高远*
刘 刘敏*
朱 朱健

*Contributed equally to this work 发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010260 浏览次数: 6563

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果蝇实验手册
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摘要：免疫荧光染色可以通过抗原-抗体特异性结合，对特定蛋白进行标记，随后通过检测荧光，对蛋白表达甚至蛋白定位进行直观、可视化的观察。免疫荧光染色可以分为一步法和两步法，一步法使用直接带有荧光基团的特异性一抗，适用范围较小，两步法则较为常用，即首先通过特异性抗体结合特定蛋白 (一抗)，随后用带有荧光基团的抗体特异性结合一抗，进而使被一抗标记的蛋白可以在荧光显微镜下被观察到。果蝇翅成虫盘是果蝇幼虫中的组织，由一层单层柱状上皮和一层单层扁平上皮组成，在果蝇发育过程中，翅成虫盘会发育成果蝇成虫翅膀。果蝇翅成虫盘的发育受到Notch，Wnt，Hedgehog，Dpp，Hippo等多种信号转导通路共同调控，是研究信号转导通路的理想模型。本文将通过对果蝇翅成虫盘上Wg蛋白的免疫荧光染色实验，详细描述果蝇翅成虫盘解剖及免疫荧光染色的实验步骤及注意事项。

Keywords: 黑腹果蝇 search 翅成虫盘 search 免疫荧光染色 search

材料与试剂

  1. 载玻片 (帆船牌载玻片, 7105)
  2. 盖玻片 (CITOGLAS, 10212020C)
  3. 1.5 ml塑料离心管 (Corning, AXYGEN, catalog number: MCT-150-C)
  4. 4%多聚甲醛 (Paraformaldehyde, PFA) (Merck, Sigma-Aldrich, catalog number: 441244)
  5. 磷酸缓冲液 (1× PBS) (Coolaber, catalog number: PM5090)
  6. Triton X-100 (VWR Life Science, AMRESCO, catalog number: 0694)
  7. 牛血清蛋白BSA (VWR Life Science, AMRESCO, catalog number: 0332)
  8. Wg抗体 (DSHB, 4D4)
  9. 山羊抗小鼠IgG 568 nm荧光二抗 (Thermo Fisher Scientific, Invitrogen, catalog number: A-11004)
  10. 甘油 (Merck, Sigma-Aldrich, catalog number: G5516)
  11. 指甲油 (SEPHORA, OPI, 5708)
  12. 封片剂 (Maravai LifeSciences, Vector Laboratories, VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI, H-1200)
  13. Schneider果蝇培养基 (Thermo Fisher Scientific, Gibco, catalog number: 21720-024)
  14. PBST (见溶液配方)
  15. PBST-BSA (见溶液配方)

仪器设备

  1. 解剖镊 (Regine, Venus, 5)
  2. 解剖显微镜 (Leica, S6E)
  3. 脱色摇床 (杭州米欧, RH-24)
  4. 4 °C低温层析冷柜 (松源华兴，SL-II型数控层析冷柜)
  5. 移液器 (Gilson, P2-P1000)
  6. 激光扫描共聚焦显微镜 (Leica, model: TCS SP8)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：高远, 刘敏, 朱健. (2019). 果蝇翅成虫盘免疫荧光染色. Bio-101: e1010260. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010260.
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How to cite: Gao, Y., Liu, M. and Zhu, A. J. (2019). Immunofluorescence Staining in Drosophila Wing Imaginal Discs. Bio-101: e1010260. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010260.
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分类

细胞生物学 > 细胞染色

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