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果蝇Schneider 2细胞免疫荧光染色

Immunohistochemistry of Drosophila Schneider 2 Cell

张 张乐冰*
刘 刘敏*
朱 朱健

*Contributed equally to this work 发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010258 浏览次数: 5369

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果蝇实验手册
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摘要：免疫荧光染色是一种重要的研究目的蛋白在组织和细胞中定位的手段。其原理是通过在固定的组织和细胞中加入特异识别目的蛋白并带有特定荧光标记的抗体，使抗体和目的蛋白结合，通过对抗体的荧光信号成像分析，得到目的蛋白在组织和细胞中的位置。免疫荧光染色不仅可以标记果蝇体内的目的蛋白的组织定位，也可以在体外培养的细胞中标记目的蛋白在单个细胞中的亚细胞定位。果蝇的Schneider 2 (S2) 细胞系是最常用的一种果蝇细胞系，本方案以S2细胞系为例，介绍在果蝇体外培养细胞系统中的免疫荧光染色方法。

Keywords: 果蝇 search S2细胞 search 免疫荧光染色 search

材料与试剂

  1. 移液枪头
  2. 24孔细胞培养板 (Thermo Fisher Scientific, Nunc, catalog number: 140675)
  3. 15 ml塑料离心管 (Thermo Fisher Scientific, Nunc, catalog number: 339650)
  4. 1.5 ml离心管 (Corning, AXYGEN, catalog number: MCT-150-C)
  5. 载玻片 (Thermo Fisher Scientific, Superfrost AA00008032E00MNT10)
  6. 盖玻片 (Thermo Fisher Scientific, CB00100RA120MNT0)
  7. 封口膜 (VWR Life Science, Parafilm, catalog number: PM-996)
  8. 果蝇S2细胞
  9. 质粒：pUAST-V5-misshapen，pActin-Gal4
  10. 磷酸缓冲液干粉 (1× PBS) (Coolaber, catalog number: PM-5090-50)
  11. 75%酒精 (ANNJET，75%酒精消毒液)
  12. 去离子水
  13. 多聚甲醛 (paraformaldehyde, PFA) (Merck, Sigma-Aldrich, catalog number: 441244) 4 °C保存
  14. Triton X-100 (VWR Life Science, AMRESCO, catalog number: 0694)
  15. 小牛血清蛋白 (VWR Life Science, AMRESCO, catalog number: 0332) 4 °C保存
  16. 多聚赖氨酸母液 (Poly-L-lysine solution) (Merck, Sigma-Aldrich, catalog number: P4832) 4 °C保存
  17. 刀豆蛋白A (Concanavalin A) (Merck, Sigma-Aldrich, catalog number: C5275) -20 °C保存
  18. 封片剂 (Maravai LifeSciences, Vector Laboratories, VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI H-1200) 4 °C保存
  19. (可选) 80%甘油
  20. 指甲油 (SEPHORA, OPI, catalog number: 5708)
  21. 一抗mouse anti-V5 (Thermo Fisher Scientific, Invitrogen, catalog number: 46 0705) 浓度1:2,000
  22. 二抗Goat anti-mouse 488 (Thermo Fisher Scientific, Alexa Fluor® Plus 488, catalog number: A32723)
  23. 磷酸缓冲液(1× PBS) (见溶液配方)
  24. 多聚赖氨酸溶液 (见溶液配方)
  25. 刀豆蛋白A溶液 (见溶液配方)
  26. 4%多聚甲醛-PBS溶液 (见溶液配方)
  27. 0.1% Triton X-100-PBS溶液 (见溶液配方)
  28. 0.2%小牛血清蛋白-PBS溶液 (见溶液配方)
  29. 一抗溶液 (见溶液配方)
  30. 二抗溶液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 镊子 (赛拓，1380)
  2. 移液枪 (Gilson, P1000, P200, P10)
  3. 荧光显微镜 (Leica, model: DM IL LED)
  4. 共聚焦显微镜 (Leica, model: TCS SP8)
  5. 细胞培养箱 (SANYO, model: MCO-18AIC)：有恒温功能和保湿功能即可，温度设定为25 °C，湿度设定为70%。果蝇S2细胞不需要通入CO2
  6. 摇床 (Kylin Bell，orbital shaker TS-1)
  7. 层析柜 (松源华兴，SL-II型数控层析冷柜)
  8. 恒温水浴锅 (Thermo Fisher Scientific, ISOTEMP 202)
  9. 电子天平 (Mettler Toledo, model: PL602-S)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：张乐冰, 刘敏, 朱健. (2019). 果蝇Schneider 2细胞免疫荧光染色. Bio-101: e1010258. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010258.
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How to cite: Zhang, L. B., Liu, M. and Zhu, A. J. (2019). Immunohistochemistry of Drosophila Schneider 2 Cell. Bio-101: e1010258. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010258.
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分类

细胞生物学 > 细胞染色

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