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果蝇组织免疫组织化学

Immunohistochemistry of Drosophila Tissues

吴 吴铮
刘 刘冀珑

发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010256 浏览次数: 10107

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果蝇实验手册
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摘要：免疫组织化学用于研究组织中蛋白质的定位。通过带有显色剂或荧光标记的抗体对抗原的特异性结合，可以实现组织中蛋白质的可视化，从而对组织和细胞中的蛋白质进行定性，定位，定量等分析。免疫组化通常分为一步法和两步法。在一步法中，特异性抗体上直接带有显色剂或荧光基团。在更广泛使用的二步法中，被固定和通透化的组织首先与一抗混合。在一抗特异性结合目标蛋白后，加入带有显色剂或荧光基团的二抗特异性结合一抗，使目标蛋白可以在显微镜下被观察到。本方案以果蝇卵巢为例，结合绿色荧光蛋白对两种蛋白同时进行免疫荧光染色，用聚光扫描共聚焦显微镜同时进行四通道扫描，从而达到对三种蛋白以及DNA在细胞中的分布进行同步分析。

Keywords: 果蝇 search 免疫组化 search 免疫荧光 search

材料与试剂

  1. 培养皿
  2. 载玻片
  3. 盖玻片
  4. 雌性果蝇成虫
  5. Grace’s Insect Medium
  6. 4%多聚甲醛 (paraformaldehyde, PFA)
  7. PBS (10×) (Beyotime, ST476)
  8. TritonTM X-100
  9. 马血清
  10. 一抗 (特异性结合目标蛋白)
    1)
    兔抗c-Myc
    2)
    山羊抗CTP合成酶 (CTP synthase, CTPS)
  11. 二抗 (带有荧光基团，特异性结合一抗)
    1)
    Texas Red狗抗山羊IgG
    2)
    Cy5狗抗兔IgG
  12. DNA荧光染料: Hoechst 33342
  13. 凡士林
  14. 指甲油
  15. 磷酸缓冲液 (1× PBS) (见溶液配方)
  16. PST (1×) (见溶液配方)

仪器设备

  1. 镊子
  2. 解剖显微镜 (OLYMPU SZ61)
  3. 移液器
  4. 激光扫描共聚焦荧光显微镜 (Leica SP5II或者SP8)
  5. 果蝇二氧化碳麻醉工作站

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：吴铮 , 刘冀珑 . (2019). 果蝇组织免疫组织化学. Bio-101: e1010256. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010256.
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How to cite: Wu, Z. and Liu, J. L. (2019). Immunohistochemistry of Drosophila Tissues. Bio-101: e1010256. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010256.
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分类

分子生物学 > 蛋白质

细胞生物学 > 细胞染色

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