摘要:mRNA-seq是通过逆转录过程将细胞产生的RNA转化为DNA (cDNA,互补,并对获得的cDNA进行文库构建)。然后对得到的DNA进行测序,并从观察到的特定DNA丰度中,从中推断细胞中mRNA的原始量。大多数mRNA-seq分析的目标是找到在实验条件下转录水平发生变化的基因或转录本,即差异表达。通过找到这些基因和转录本,我们可以推断出不同条件的功能特征。mRNA-seq通常建议的每种状态最小生物学重复次数为3次,5次更好。如果预期到结果可能差异微妙或者生物变异显着时 (例如对活体动物进行实验),需要更多的重复。所以,一组实验 (对照组和实验组) 意味着会有6~10个样品,产生6~10个或者更多fastq文件。所以能够明确以及流程化分析过程十分重要。
仪器设备
- 服务器 (型号:I620-G20;系统:centos7;CPU:Xeon(R) CPU E5-2620 v4 @2.10GHz,3核),用于运行相关命令
- 普通个人电脑 (需要已经安装好R,能调用个人终端。本教程是使用Mac系统进行操作的。)
软件
- FastQC (v0.11.8)
- mulitiQC (v1.6)
- flexbar (v 3.3.0)
- STAR (STAR_2.6.0a)
- samtools (v1.9)
- HTSeq (0.11.0)
- R (v3.5.1)
实验步骤
Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
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