Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

青杆花粉细胞中蛋白免疫染色定位实验—以RAC1蛋白为例

Subcellular Localization of RAC1 in Pollen Tube of P. willsonii by Immunostaining and Confocal Laser Scanning Microscopy

张凌云 张凌云

发表时间: 2018年08月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010240 浏览次数: 2653

pdf PDF PDF
ask 提问与回复
引用
收藏
被引用
摘要：通过获得的目的蛋白抗体，在一定条件下进行抗原抗体结合反应，进行目的蛋白的亚细胞定位实验。本实验一抗为RAC1多克隆抗体，二抗为连接荧光素抗体。通过激光共聚焦扫描显微镜观察，进行RAC1蛋白在青杄花粉管发育过程中细胞定位。

Keywords: 蛋白质 search 免疫定位 search 细胞 search

材料与试剂

注: 以下试剂除特别说明外，均购自Sigma-Aldrich公司。


  1. 载玻片
  2. 盖玻片
  3. 移液枪头
  4. 多聚赖氨酸
  5. 多聚甲醛
  6. Triton X-100
  7. Cellulase R-10 
  8. Macerozyme R-10 
  9. 甘露醇
  10. CaCl2
  11. 蛋白酶抑制剂 (Aprotinin, Pepstatin A, Chymostatin, Leupeptin; Calbiochem)
  12. 脱脂奶粉或BSA 
  13. 10%胎牛血清 (FBS)
  14. anti- RAC1 antibody (Nicotiana tabacum) was a generous gift from Prof. Alice Cheung (University of Massachusetts, Amherst, MA)
  15. 免疫前动物血清
  16. NaCl
  17. KCl
  18. Na2HPO4
  19. KH2PO4
  20. 碘化丙锭 (PI)
  21. PBS缓冲液 (见溶液配方)
  22. 固定液 (见溶液配方)
  23. 1.5% Cellulase R-10 (见溶液配方)
  24. 1.2% Macerozyme R-10 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 支架
  2. 离心机
  3. 落射式荧光显微镜
  4. LCSM (ZEISS, model: LSM 510 META)

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：张凌云. (2018). 青杆花粉细胞中蛋白免疫染色定位实验—以RAC1蛋白为例. Bio-101: e1010240. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010240.
ris ris 下载引用格式
How to cite: Zhang, L. Y. (2018). (2018). Subcellular Localization of RAC1 in Pollen Tube of P. willsonii by Immunostaining and Confocal Laser Scanning Microscopy. Bio-101: e1010240. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010240.
ris ris Download Citation in RIS Format

分类

细胞生物学 > 细胞成像 > 共聚焦显微镜

分子生物学 > 蛋白质 > 检测

植物科学 > 植物分子生物学 > 蛋白质

您对这篇实验方法有问题吗？

在此处发布您的问题，我们将邀请本文作者来回答。同时，我们会将您的问题发布到Bio-protocol Exchange，以便寻求社区成员的帮助。

post 发布问题
0 Q&A