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草莓超薄切片制样及切片观察

Preparation of Ultrathin Section and Observation of Strawberry Sub-cellar Structure by Transmission Electron Microscopy

张 张伟伟
邢 邢宇

发表时间: 2018年08月05日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010216 浏览次数: 5294

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实验目的：超薄切片技术是最基本、最常用的透射电镜生物制样技术。通过固定、脱水、包埋、切片和染色等一系列实验，利用透射电镜观察超薄切片可了解亚细胞结构，获得真实完整、清晰的电镜照片。

Keywords: 草莓果肉 search 包埋 search 切片 search 染色 search 透射电镜 search

材料与试剂

  1. 剪刀
  2. 牙签
  3. 离心管 (1.5 ml，10 ml，50 ml)
  4. 1 ml注射器
  5. 包埋板
  6. 硫酸纸 (称量用纸)
  7. 铅笔
  8. 双面刀片
  9. 25 mm的玻璃条
  10. 夹头
  11. 叉子
  12. 胶布
  13. 石蜡
  14. 载玻片
  15. 滤纸
  16. 培养皿
  17. 吸管
  18. 锡箔纸
  19. 封口膜
  20. 草莓果肉、叶片
  21. 板栗叶片、花粉
  22. 戊二醛
  23. 0.1 M酸缓冲液
  24. 多聚甲醛
  25. 锇酸 (OsO4) (中兴百瑞)
  26. 纯酒精
  27. 重蒸水
  28. 丙酮
  29. 包埋剂
  30. 氯仿
  31. 醋酸铀染液 (中兴百瑞)
  32. NaOH颗粒
  33. 柠檬酸铅 (中兴百瑞)
  34. Spurr树脂套装：ERL-4221、DER-736、NSA、DMAE (中兴百瑞，catalog number: ZB-S0070)
  35. Na2HPO4•12H2O
  36. NaH2PO4•2H2O
  37. Spurr树脂(偏硬性) (见溶液配方)
  38. 2.5 %戊二醛固定液 (见溶液配方)
    1)
    0.2 M磷酸氢二钠
    2)
    0.2 M磷酸二氢钠 
    3)
    0.2 M磷酸缓冲液
  39. 锇酸固定液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 镀膜铜网 (中兴百瑞)
  2. 胶条 (制水槽) (中兴百瑞)
  3. 通风橱
  4. 烘箱
  5. 修块机 (Leica)
  6. 制刀机 (Leica)
  7. 切片机 (Leica)
  8. 捞样器 (中兴百瑞)
  9. 干燥器
  10. 透射电镜

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：张伟伟, 邢宇 . (2018). 草莓超薄切片制样及切片观察. Bio-101: e1010216. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010216.
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分类

植物科学 > 植物细胞生物学 > 细胞成像

细胞生物学 > 细胞成像 > 固定组织成像

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