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农杆菌感受态制备及转化

Preparation and Transformation of Agrobacterium Competent Cells

徐 徐远涛
徐 徐强

发表时间: 2018年07月10日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010204 浏览次数: 16410

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实验原理：在利用根癌农杆菌介导的基因遗传转化过程中，首先要得到携带目的基因载体的农杆菌菌株。细胞经过CaCl2处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的细胞，即感受态细胞。农杆菌感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备，即用低渗CaCl2溶液在低温 (0 °C) 时处理快速生长的细菌，从而获得感受态。此时细菌膨胀成球形，外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基－钙磷酸复合物粘附在细菌表面，通过热激作用促进细胞对DNA的吸收进而实现载体质粒的农杆菌转化。
实验目的：制备农杆菌感受态细胞，将表达载体质粒转 (以pK7WG2D_Cs7g29500-ox为例) 入农杆菌感受态细胞中，获得携带表达载体的农杆菌菌株用于基因遗传转化。

Keywords: 农杆菌 search 感受态 search 制备 search 热激转化 search

材料与试剂

  1. 各种型号枪头
  2. 各种型号离心管
  3. 吸水纸
  4. GV3101农杆菌菌株
  5. NaCl
  6. 胰蛋白胨
  7. 酵母提取物
  8. 琼脂粉
  9. 利福平 (50 mg/ml)
  10. CaCl2
  11. 壮观霉素
  12. 甘油
  13. 0.02 mol/L CaCl2 (见溶液配方)
  14. CaCl2/15%甘油混合液 (见溶液配方)
  15. LB培养基 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 恒温培养箱
  2. 超净工作台
  3. 恒温摇床
  4. 冷冻高速离心机
  5. -80 °C超低温冰箱
  6. 4 °C冰箱
  7. 分光光度计

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：徐远涛, 徐强. (2018). 农杆菌感受态制备及转化. Bio-101: e1010204. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010204.
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How to cite: Xu, Y. T. and Xu, Q.  (2018). Preparation and Transformation of Agrobacterium Competent Cells. Bio-101: e1010204. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010204.
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分类

植物科学 > 植物转化 > 农杆菌介导的转化方法

分子生物学 > DNA > 转化

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