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柑橘总RNA提取

Extraction of Total RNA from Citrus

徐 徐远涛
刘 刘永忠
陶 陶能国
徐 徐强
邓 邓秀新

发表时间: 2018年07月10日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010200 浏览次数: 5416

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实验原理：Trizol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出来的核酸酶，保持RNA的完整性。酸性条件使RNA与DNA分离，加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中< /b>。收集上层水样层后，可以通过异丙醇沉淀来分离RNA。
实验目的：提取柑橘总RNA用于后续RT-PCR、qRT-PCR、基因克隆、cDNA文库构建、Northern blotting等实验。

Keywords: 柑橘 search RNA search 提取 search 检测 search

材料与试剂

  1. RNase-free 离心管 (10 ml、1.5 ml、200 μl)
  2. RNase-free枪头 (5 ml、1 ml、200 μl、20 μl)
  3. 液氮
  4. 氯仿
  5. 异丙醇
  6. 无水乙醇
  7. 异硫氰酸胍
  8. 硫氰酸铵
  9. 水饱和酚
  10. NaAc
  11. 甘油 (丙三醇)
  12. 8-羟基喹啉
  13. 正丁醇
  14. CTAB
  15. DEPC (焦碳酸二乙酯)
  16. Tris Base
  17. HCl
  18. EDTA-Na2
  19. NaOH
  20. Sarcosy
  21. NaCl
  22. 冰醋酸
  23. 3 mol/L NaAc (pH 5.2) (见溶液配方)
  24. Trizol Buffer (见溶液配方)
  25. 75%乙醇 (见溶液配方)
  26. TESAR (见溶液配方)
  27. Aq/CTAB与Bu/CTAB (见溶液配方)
  28. 0.2 mol/L NaCl (见溶液配方)
  29. 3 mol/L NaAc (见溶液配方)
  30. DEPC水 (见溶液配方)
  31. 0.5 mol/L EDTA (见溶液配方)

仪器设备

  1. 研钵
  2. -20 °C冰箱
  3. 各种规格的移液器
  4. 离心机 (配备10 ml、1.5 ml转头，转速大于14,000 x g)
  5. 振荡涡旋仪
  6. 量筒 (500 ml、100 ml)
  7. pH计
  8. 磁力搅拌器
  9. 带盖广口瓶 (5 L)
  10. 蓝盖瓶 (1 L)
  11. 通风橱
  12. 电泳槽
  13. 制胶板
  14. 凝胶成像仪

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：徐远涛 , 刘永忠 , 陶能国 , 徐强 , 邓秀新. (2018). 柑橘总RNA提取. Bio-101: e1010200. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010200.
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How to cite: Xu, Y. T., Liu, Y. Z., Tao, N. G., Xu, Q. and Deng, X. X. (2018). Extraction of Total RNA from Citrus. Bio-101: e1010200. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010200.
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分类

植物科学 > 植物分子生物学 > RNA > RNA 提取

分子生物学 > RNA > RNA 提取

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