Agrobacterium-mediated Transformation of Citrus Using Epicotyl Sections

材料与试剂

1. 滤纸
   
2. 封口胶
   
3. 橡皮筋
   
4. 柑橘种子
   
5. 75%酒精
   
6. 次氯酸钠
   
7. NaOH
   
8. 蒸馏水
   
9. 农杆菌菌株EHA105 (携带含目的基因载体)
   
10. 6-Benzylaminopurine (6-BA) 
    
11. Kinetin (KT) 
    
12. Naphthalene acetic acid (NAA)
    
13. Indole-3-acetic acid (IAA) 
    
14. Kanamycin (Kan)
    
15. Dimethyl Sulfoxide (DMSO)
    
16. Acetosringone (AS) 
    
17. Cephalosporins (Cef)
    
18. 培养基母液 (详见柑橘组织培养常用培养基配制方法 [杨雯惠等，2018])
    1)

    肌醇储备液 (100x) 
    
    2)

    甘氨酸储备液 (100x) 
    
    3)

    微量储备液 (100x)
    
    4)

    大量储备液 (100x) 
    
    5)

    铁盐储备液 (100x) 
    
    6)

    Vitamin储备液 (100x)
    
19. 激素类试剂母液 (见柑橘原生质体融合-电融合 [刘丹等，2018])
    1)

    6-BA储备液 (1 mg/ml)
    
    2)

    KT储备液 (1 mg/ml)
    
    3)

    IAA储备液 (1 mg/ml) 
    
    4)

    NAA储备液 (1 mg/ml)
    
20. 培养基 (详见柑橘组织培养常用培养基配制方法 [杨雯惠等，2018])
    1)

    MT基本培养基
    
    2)

    MT播种培养基
    
    3)

    生芽培养基 
    
    4)

    MT悬浮培养基 
    
    5)

    生根培养基 
    
    6)

    LB培养基
    
21. 50 mg/ml AS储备液 (见溶液配方)
    
22. 400 mg/ml Cef储备液 (见溶液配方)
    
23. 50 mg/ml Kan储备液 (见溶液配方)
    
24. 共培养基 (见溶液配方)
    
25. 筛选培养基 (见溶液配方)
    

仪器设备

1. 超净台
   
2. 酒精灯
   
3. 镊子
   
4. 刀片
   
5. 刀柄
   
6. 平皿
   
7. 三角瓶
   
8. 摇床
   
9. 培养箱
   
10. 4 °C冷库
    
11. -80 °C冰箱
    
12. 离心机
    
13. 紫外分光光度计
    
14. 无菌过滤器
    

实验步骤