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柑橘染色体涂片制片法

Preparation of Smear Slides for Observing the Chromosomes of Citrus

王 王蓉*
苗 苗茵 *
兰 兰红 *
陈 陈春丽
郭 郭文武

*Contributed equally to this work 发表时间: 2018年06月12日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010191 浏览次数: 5061

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实验原理及目的：植物涂片法指将植物材料酶解去掉细胞壁后，经低渗液处理，用针尖敲碎后在玻片上平铺展开，火焰干燥使染色体膨胀，得到分散良好、背景干净的染色体和细胞核，又称低渗火焰干燥法。涂片制片法在植物细胞生物学、细胞遗传学、分子细胞生物学等研究中应用广泛，主要进行染色体计数、核型分析、荧光原位杂交等相关实验。

Keywords: 涂片 search 染色体 search 细胞学 search

材料与试剂

  1. 盆
  2. 吸水纸
  3. 培养皿
  4. 滤纸
  5. 纱布
  6. 2 ml离心管
  7. 吸管
  8. 载玻片
  9. 柑橘果实
  10. 饱和对二氯苯 (RT) 
  11. 0.075 mol/L KCl (RT) 
  12. 乙醇
  13. 乙酸
  14. 柠檬酸
  15. 二水合柠檬酸三钠
  16. ddH2O
  17. Pectinase (Aspergillus niger, Sigma-Aldrich, 4 °C) 
  18. Cellulose (“Onozuka”RS, Yakult Pharmaceutical Industry, 4 °C) 
  19. Pectolgase (Y-23, Yakult Pharmaceutical Industry, 4 °C) 
  20. 10x EB (柠檬酸钠缓冲液) (见溶液配方) 
  21. 酶混合液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 刀
  2. 镊子
  3. 手术刀
  4. 打火机
  5. 大头针
  6. 28 °C培养箱
  7. 水浴锅
  8. -20 °C冰箱
  9. 摇床
  10. 解剖镜
  11. 移液器
  12. 相差显微镜 (Olympus, model: BH-2)

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王蓉, 苗茵 , 兰红 , 陈春丽 , 郭文武 . (2018). 柑橘染色体涂片制片法. Bio-101: e1010191. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010191.
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How to cite: Wang, R., Miao, Y., Lan, H., Chen, C. L. and Guo, W. W. (2018). Preparation of Smear Slides for Observing the Chromosomes of Citrus. Bio-101: e1010191. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010191.
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分类

植物科学 > 植物细胞生物学 > 组织分析

细胞生物学 > 细胞成像 > 固定细胞成像

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