材料与试剂

1. 滤纸
   
2. 玻璃器皿 (90 mm)
   
3. 双圈定性滤纸 (中速)
   
4. 生根管
   
5. 刀片
   
6. 专用细胞培养皿
   
7. 玻璃离心管
   
8. 长吸管
   
9. 0.22 μm醋酸纤维微孔滤膜
   
10. 橡皮筋
    
11. 封口膜
    
12. 活性炭
    
13. 锡箔纸
    
14. 柑橘种子
    
15. 柑橘胚性愈伤
    
16. 75%酒精
    
17. 3% NaClO
    
18. NaOH
    
19. FDA
    
20. 纤维素酶R-10 (Yakult Honsha)
    
21. 离析酶R-10 (Yakult Honsha)
    
22. DMSO
    
23. Sucrose
    
24. 椰子汁20 ml
    
25. 6-Benzylaminopurine (6-BA) 
    
26. Kinetin (KT) 
    
27. Naphthalene acetic acid (NAA)
    
28. Indole-3-acetic acid (IAA)
    
29. KOH
    
30. KH₂PO₄
    
31. KNO₃
    
32. MgSO₄
    
33. CuSO₄
    
34. CaCl₂·2H₂O
    
35. NaH₂PO₄·2H₂O
    
36. 甘露醇
    
37. BH3营养液配制所需试剂：
    1)

    麦芽提取物
    
    2)

    蔗糖
    3)

    谷氨酰胺
    4)

    七水合硫酸镁
    
    5)

    磷酸二氢钾
    
    6)

    二水合氯化钙
    
    7)

    氯化钾
    
    8)

    水解酪蛋白
    
    9)

    碘化钾
    
    10)

    硼酸
    11)

    二水合钼酸钠
    
    12)

    五水合硫酸铜
    
    13)

    六水合氯化钴
    
    14)

    一水合硫酸锰
    
    15)

    乙二胺四乙酸
    
    16)

    七水合硫酸亚铁
    
    17)

    肌醇
    18)

    果糖
    19)

    核糖
    20)

    木糖
    21)

    甘露糖
    
    22)

    鼠李糖
    
    23)

    纤维二糖
    
    24)

    半乳糖
    
    25)

    丙酮酸钠盐
    
    26)

    柠檬酸
    
    27)

    苹果酸Malic acid
    
    28)

    延胡索酸Fumaric acid
    
    29)

    生物素
    
    30)

    核黄素
    
    31)

    叶酸
    32)

    对氨基苯甲酸
    
    33)

    氯化胆碱
    
    34)

    抗坏血酸
    
    35)

    泛酸钙
    
    36)

    维生素B1
    
    37)

    维生素B6 
    
    38)

    烟酸
    39)

    维生素A
    
    40)

    维生素D3
    
    41)

    维生素B12 
38. 培养基相关母液 (见溶液配方)
    1)

    肌醇储备液 (100x)
    
    2)

    甘氨酸储备液 (100x)
    
    3)

    微量储备液 (100x)
    
    4)

    Fe²⁺-EDTA储备液 (100x) 
    
    5)

    Vitamin储备液 (100x)
    
    6)

    大量储备液 (10x)
    
    7)

    6-BA储备液 (1 mg/ml) 
    
    8)

    KT储备液 (1 mg/ml) 
    
    9)

    IAA储备液 (1 mg/ml)
    
    10)

    NAA储备液 (1 mg/ml)
39. 培养基的配制 (见溶液配方)
    1)

    胚状体诱导培养基 
    
    2)

    胚状体增殖培养基
    
    3)

    固体培养基
    
    4)

    悬浮培养基 
    
    5)

    播种培养基
    
    6)

    生芽培养基
    
    7)

    生根培养基
    
    8)

    0.6 M EME培养基
    
    9)

    0.15 M EME培养基
    
    10)

    CPW13 (见溶液配方)
    
    11)

    CPW25 (见溶液配方)
    
    12)

    电融合液 (见溶液配方)
    
    13)

    BH3液体培养基 (见溶液配方)
    

仪器设备

1. 酒精灯
   
2. 镊子
   
3. 三角瓶
   
4. 刀柄
   
5. 325目不锈钢过滤网筛
   
6. 超净台
   
7. 摇床
   
8. 培养箱
   

实验步骤