Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

农杆菌介导水稻快速转化

Agrobacterium-mediated Rapid Transformation of Rice

崔 崔莹
蔡 蔡朝霞
林拥军 林拥军
陈 陈浩

发表时间: 2018年03月15日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010176 浏览次数: 11492

返回专辑目录

Rice Protocol eBook
pdf PDF PDF
ask 提问与回复
引用
收藏
被引用
实验原理：Toki等(2006)发现，水稻成熟胚在诱导愈伤1 d后可以被农杆菌侵染，诱导愈伤5 d后可以被高效转化。Toki (1997)研究表明在32 °C、光照条件下，水稻愈伤组织可以快速分裂。在该条件下进行筛选培养，14 d可以得到明显的抗性愈伤组织。本实验的目的是在实验室已有的遗传转化方法基础上，参考Toki等(1997, 2006)发表的部分实验参数，建立快速的水稻转化方法，以缩短遗传转化周期。本实验在32 °C、光照条件下诱导愈伤，对诱导5 d的水稻愈伤组织进行侵染，随后在32 °C、光照条件下以潮霉素作为筛选剂进行筛选培养，14 d后获得了抗性愈伤组织，对抗性愈伤组织进行分化培养，获得稳定的转化植株。从愈伤组织诱导到转化再生植株生根，整个实验周期约为50 d。

Keywords: 水稻成熟胚 search 农杆菌介导 search 快速转化 search

材料与试剂

  1. 滤纸
  2. 水稻种子
  3. 75%酒精
  4. 吐温20
  5. 农杆菌菌株EHA105 (携带含目的基因载体)
  6. 6-Benzylaminopurine (6-BA) (Sigma, catalog number: B-3408)
  7. Kinetin (KT) (Sigma, catalog number: K-0753)
  8. Naphthalene acetic acid (NAA) (Sigma, catalog number: N-0640)
  9. Indole-3-acetic acid (IAA) (Sigma, catalog number: I-2886)
  10. 2, 4-Dichlorophenoxyacetic acid (2, 4-D) (Sigma, catalog number: D-7299)
  11. Kanamycin (USB, catalog number: 17924)
  12. Casein Enzymatic Hydrolysate (CH) (Sigma, catalog number: N-4642)
  13. Carbenicillin (Cn) (Bio Basic INC. catalog number: CDJ469)
  14. Hygromycin B (Hn) (Roche, catalog number: 10843555001)
  15. Nicotinic acid (Sigma, catalog number: N-0765)
  16. Pyridoxine HCl (VB6) (Sigma, catalog number: P-8666)
  17. Thiamine HCl (VB1) (Sigma, catalog number: T-3902)
  18. Inositol (Sigma, catalog number: I-3011)
  19. Phytagel (Sigma, catalog number: P-8169)
  20. Dimethyl Sulfoxide (DMSO) (Sigma, catalog number: D-5879)
  21. Acetosringone (AS) (Aldrich chem., CO 01531 EG)
  22. Agar powder (日本分装，catalog number: BM0212)
  23. Glycine (日本分装，catalog number: BA0802)
  24. Proline (进口分装，catalog number: A1122)
  25. D-sorbitol (上海生工，catalog number: SB0491)
  26. NH4NO3
  27. KH2PO4
  28. KNO3
  29. MgSO4·7H2O
  30. CaCl2∙2H2O
  31. MnSO4·4H2O
  32. ZnSO4·7H2O
  33. H3BO3
  34. KI
  35. Na2MoO4·2H2O
  36. CoCl2·6H2O
  37. CuSO4·5H2O
  38. (NH4)2SO4
  39. FeSO4∙7H2O
  40. Na2EDTA∙2H2O
  41. KOH
  42. HgCl2
  43. Glucose
  44. Sucrose
  45. LB培养基
  46. 封口胶
  47. MSmax储备液(10x) (见溶液配方)
  48. MSmin储备液(100x) (见溶液配方)
  49. N6max储备液(10x) (见溶液配方)
  50. N6min储备液(100x) (见溶液配方)
  51. Fe2+-EDTA储备液(100x) (见溶液配方)
  52. Vitamin储备液(100x) (见溶液配方)
  53. 6-BA储备液(1 mg/ml) (见溶液配方)
  54. KT储备液(1 mg/ml) (见溶液配方)
  55. 2, 4-D储备液(1 mg/ml) (见溶液配方)
  56. IAA储备液(1 mg/ml) (见溶液配方)
  57. NAA储备液(1 mg/ml) (见溶液配方)
  58. 200 mM AS储备液 (见溶液配方)
  59. 1 N KOH储备液 (见溶液配方)
  60. 0.15% HgCl2 (见溶液配方)
  61. 50% 葡萄糖 (见溶液配方)
  62. 250 mg/ml Cn (见溶液配方)
  63. 50 mg/ml Kan (见溶液配方)
  64. 诱导培养基 (见溶液配方)
  65. 悬浮培养基 (见溶液配方)
  66. 共培养基 (见溶液配方)
  67. 筛选培养基 (见溶液配方)
  68. 分化培养基 (见溶液配方)
  69. 生根培养基 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 超净台
  2. 酒精灯
  3. 镊子
  4. 平皿
  5. 三角瓶
  6. 生根管
  7. 摇床
  8. 培养箱

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：崔莹, 蔡朝霞, 林拥军, 陈浩. (2018). 农杆菌介导水稻快速转化. Bio-101: e1010176. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010176.
ris ris 下载引用格式
How to cite: Cui, Y., Cai, C. X., Lin, Y. J. and Chen, H. (2018). Agrobacterium-mediated Rapid Transformation of Rice. Bio-101: e1010176. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010176.
ris ris Download Citation in RIS Format

分类

植物科学 > 植物转化 > 农杆菌介导的转化方法

您对这篇实验方法有问题吗？

在此处发布您的问题，我们将邀请本文作者来回答。同时，我们会将您的问题发布到Bio-protocol Exchange，以便寻求社区成员的帮助。

post 发布问题
0 Q&A