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水稻超氧化物歧化酶(SOD)活性测定

Determination of Superoxide Dismutase (SOD) Activity in Rice

都 都浩
王 王妮丽
熊立仲 熊立仲

发表时间: 2018年04月27日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010162 浏览次数: 11350

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实验原理：超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)是一种清除超氧阴离子自由基的酶，逆境环境导致超氧阴离子自由基的积累，诱导植物体内产生SOD。本实验依据超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收峰。而SOD可清除超氧阴离子自由基，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。
实验目的：检测水稻受到生物逆境处理后，体内超氧化物歧化酶(SOD)活性及清除活性氧的能力。

Keywords: 水稻 search 氮蓝四唑(NBT) search 超氧化物歧化酶SOD search 生物逆境 search

材料与试剂

  1. 样品袋
  2. 冰盒
  3. 10 ml离心管
  4. 2 ml离心管
  5. 遮光物
  6. Na2HPO4 (天净光复科技发展有限公司)
  7. NaH2PO4 (天净光复科技发展有限公司)
  8. 甲硫氨酸 (Met) (武汉创新生物技术有限公司, catalog number: BA1081)
  9. EDTA-Na2 (生工生物, catalog number: E0105-500g)
  10. 氮蓝四唑 (NBT)
  11. 0.05 mol/L磷酸缓冲液 (见溶液配方)
  12. 130 mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液 (见溶液配方)
  13. 750 µmol/L氮蓝四唑溶液 (见溶液配方)
  14. 100 µmol/L EDTA-Na2溶液 (见溶液配方)
  15. 20 µmol/L核黄素溶液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. pH试纸 (Sigma, catalog number: P-4536)或pH计(Satorius, catalog number: PB-10)
  2. 剪刀
  3. 研钵
  4. 冷冻离心机 (Eppendorf, model: centrifuge 5417R)
  5. 分析天平 (Adventurer, USA)
  6. 分光光度计 (BECKMAN DU® 640 Spectrophotometer)

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：都浩, 王妮丽, 熊立仲. (2018). 水稻超氧化物歧化酶(SOD)活性测定. Bio-101: e1010162. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010162.
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How to cite: Du, H., Wang, N. L. and Xiong, L. Z. (2018). Determination of Superoxide Dismutase (SOD) Activity in Rice. Bio-101: e1010162. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010162.
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分类

植物科学 > 植物生物化学 > 其它化合物

生物化学 > 其它化合物 > 超氧化物歧化酶

植物科学 > 植物生理学 > 非生物胁迫

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