实验原理:免疫染色类似于动物免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的技术。水稻免疫染色基本过程为:将组织酶解分离细胞核后,用特异性抗体免疫细胞核
,通过荧光标记的二抗孵育,在荧光显微镜下观测荧光强弱及分布,从而确定抗原蛋白的性质。
实验目的:根据使用抗体的类型,免疫染色可用来检测分析特定细胞时期或不同材料中组蛋白修饰情况,进而测定相关蛋白活性;或特定蛋白细胞核内的精细分布。
材料与试剂
- 200目筛子 (实验室定制)
- 2 ml离心管
- 载玻片
- 各种型号枪头
- Parafilm
- 水稻种子
- 多聚赖氨酸
- 进口试剂
- 国产试剂
- 生根培养基 (见生根培养基配方)
- 酶解液 (见溶液配方)
- Tris-HCl Buffer (见溶液配方)
- LOB1 Buffer (见溶液配方)
- Sorting Buffer (见溶液配方)
- 10x KPBS (pH 7.2) (见溶液配方)
- Blocking solution (见溶液配方)
仪器设备
- 摇床
- 量筒
- 移液枪
- 镊子
- 激光共聚焦显微镜或超高分辨率显微镜
- 真空干燥箱 (Hotpack Vacuum OVEN)
- 恒温箱 (电热恒温隔水式培养箱,黄石恒丰医疗器械有限公司)
实验步骤
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
分类
分子生物学 > 蛋白质 > 检测
植物科学 > 植物分子生物学 > 蛋白质
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