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荧光素酶酶活恢复法检测体内蛋白质互作

In vivo Detection of Protein Interactions Using Luciferase Assay

王 王磊
鄢 鄢文豪
欧 欧阳亦聃

发表时间: 2018年04月09日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010134 浏览次数: 15268

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实验原理：来自萤火虫的荧光素酶（Firefly luciferase, LUC）可以分成N和C两段蛋白质而没有酶活，将N和C端各融合另外的两个蛋白质，如果这两个蛋白质在体内可以互作的话，那么LUC的N和C端将在空间上靠近而恢复酶活，因此可以通过检测分段的LUC可否恢复酶活而判断两个蛋白质之间在体内是否存在相互作用。
实验目的：检测蛋白质之间的体内相互作用。

Keywords: 蛋白质互作 search 荧光素酶 search 体内验证 search

材料与试剂

  1. 酶标板 (Corning, catalog number: 3197)
  2. 原生质体转化相关试剂 (参阅“水稻原生质体转化”程珂等，2018)
  3. 质粒抽提试剂盒QIAGEN Plasmid Kits (QIAGEN, catalog number: 10043)
  4. 酶活检测试剂盒Dual-Luciferase® Reporter Assay System (Promega, catalog number: E1910)

仪器设备

  1. 酶标仪
  2. 分光光度计

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王磊, 鄢文豪, 欧阳亦聃. (2018). 荧光素酶酶活恢复法检测体内蛋白质互作. Bio-101: e1010134. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010134.
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How to cite: Wang, L., Yan, W. H. and Ouyang, Y. D. (2018). In vivo Detection of Protein Interactions Using Luciferase Assay. Bio-101: e1010134. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010134.
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分类

分子生物学 > 蛋白质 > 蛋白质-蛋白质相互作用

植物科学 > 植物细胞生物学 > 细胞成像

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