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烟草体系BiFC

BiFC Assay for Detecting Protein-protein Interaction in Tobacco Leaves

袁猛 袁猛
许 许纯珏

发表时间: 2018年03月16日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010133 浏览次数: 27522

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实验原理：在荧光蛋白(YFP、GFP、Luciferase等)的两个β片层之间的环结构上有许多特异性位点可以插入外源蛋白而不影响荧光蛋白的荧光活性。BiFC技术正是利用荧光蛋白家族的这一特性，将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段，再分别与目标蛋白融合表达。如果两个目标蛋白因物理相互作用而靠近，就使得荧光蛋白的两个分子片段在空间上相互靠近，重新形成有活性的荧光基团而发出荧光。
实验目的：在烟草植株活体细胞中检测蛋白质-蛋白质相互作用。

Keywords: 烟草 search BiFC search 蛋白质互作 search

材料与试剂

  1. 注射器
  2. Nicotiana benthamiana烟草
  3. 农杆菌 (已转入带目的基因的载体)
  4. MES (4-morpHolineethanesulfonic acid; Sigma, catalog number: M8250)
  5. 利福平(rifampicin; Sigma, catalog number: R3501)
    注：利福平用DMSO溶解配制。
  6. LB培养基
  7. 乙酰丁香酮
  8. MgCl2
  9. 0.5 M MES (pH 5.6) (见溶液配方)
  10. 100 mM乙酰丁香酮 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 激光共聚焦显微镜
  2. 普通离心机

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：袁猛, 许纯珏. (2018). 烟草体系BiFC. Bio-101: e1010133. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010133.
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How to cite: Yuan, M. and Xu, C. Y. (2018). BiFC Assay for Detecting Protein-protein Interaction in Tobacco Leaves. Bio-101: e1010133. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010133.
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分类

植物科学 > 植物生物化学 > 蛋白质 > 相互作用

分子生物学 > 蛋白质 > 蛋白质-蛋白质相互作用

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