材料与试剂

1. 培养皿
   
2. 滤纸
   
3. PVDF膜
   
4. 冷冻盒(冰盒)
   
5. 海绵
   
6. 保鲜膜
   
7. 各种型号的枪头
   
8. Ep管
   
9. 辣根过氧化物酶(HRP)底物 (Super Signal West Pico Chemiluminesscent Substrate, Thermo Scientific, catalog number: 34077)
   
10. 显影液、定影液 (国产试剂，按照其说明书配制)
    
11. SDS
    
12. 过硫酸胺(AP)
    
13. Tris base (FW：121.14)
    
14. 浓盐酸
    
15. TEMED (N,N,N’N’四甲基乙二胺)
    注：TEMED催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙烯酰胺的聚合。pH太低时，聚合反应受到抑制。
    
16. Tris-HCl
    
17. Glycerol
    
18. BromopHenol Blue
    
19. 甘氨酸
    
20. 甲醇
    
21. NaCl
    
22. KCl
    
23. Na₂HPO₄·12H₂O
    
24. KH₂PO₄
    
25. BSA (牛血清白蛋白)
    
26. 脱脂奶粉
    
27. Tween-20
    
28. ddH₂O
    
29. 30% [丙烯酰胺：N,N’-亚甲双丙烯酰胺=29:1 (BioRad, catalog number: 161-0156) 或37.5:1 (BioRad, catalog number: 161-0158)]
    注：一般情况下两种比例都可以使用，都可以在BioRad公司购买。为节约实验成本，也可以自己配制，方法 (以29:1为例) 见溶液配方1。
    
30. 10% SDS (十二烷基磺酸钠) (w/v) (见溶液配方)
    
31. 10% AP(过硫酸胺) (w/v) (见溶液配方)
    
32. 1.5 mol/L Tris-HCl (pH 8.8) (见溶液配方)
    
33. 0.5 M Tris-HCl (pH 6) (见溶液配方)
    
34. 4x蛋白上样缓冲液 (见溶液配方)
    
35. 10x Tris-甘氨酸电泳缓冲液 (见溶液配方)
    
36. 10x Tris-甘氨酸电泳缓冲液 (见溶液配方)
    
37. 转膜缓冲液 (见溶液配方)
    
38. 磷酸缓冲液 (PBS) (见溶液配方)
    
39. 分离胶配方 (见溶液配方)
    
40. 浓缩胶配方 (见溶液配方)
    
41. 封闭液配方 (见溶液配方)
    

仪器设备

1. 剪刀
   
2. 玻璃板
   
3. 超净工作台
   
4. 移液器
   
5. 摇床
   
6. 冰柜
   
7. Mini-PROTEAN^® Tetra System (Bio-Rad) (电泳架，梳子，转膜槽，电泳槽，玻璃板，切胶板等)
   

实验步骤