Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

细胞核蛋白分离方法

Nuclear Protein Isolation Protocol

徐 徐艳
陈 陈香嵩
熊立仲 熊立仲

发表时间: 2018年04月27日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010122 浏览次数: 14580

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实验原理：样品在Buffer A作用下细胞破裂，释放胞浆蛋白及其他蛋白，离心后所得沉淀中包含细胞核，再经高盐Buffer抽提可得到核蛋白。
实验目的：抽提核蛋白可用于PAGE电泳，Western blot，免疫共沉淀等下游实验，可排除胞质蛋白及其他蛋白的影响。

Keywords: 核蛋白抽提 search 高盐buffer search 低盐buffer search 透析 search

材料与试剂

    注：所有试剂尽量用sigma进口试剂。

    1. 液氮
    2. 10 ml/50 ml离心管
    3. 1.5 ml离心管
    4. Miracloth (Calbiochem, catalog number: 475855)
    5. 各种型号枪头
    6. HEPES (pH 7.8)
    7. KCl
    8. MgCl2
    9. EDTA
    10. Sucrose
    11. Triton X-100
    12. DTT
    13. PMSF
    14. Glycerol
    15. Buffer A (见溶液配方)
    16. Low Salt Buffer (见溶液配方)
    17. High Salt Buffer (见溶液配方)
    18. Dialysis Buffer (透析液) (见溶液配方)

    仪器设备

    1. 量筒
    2. 烧杯
    3. 天平
    4. 高速离心机
    5. 移液枪
    6. 振荡器
    7. 摇床
    8. 磁力转子
    9. 磁力搅拌器
    10. 计时器
    11. 透析袋

    实验步骤

    Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
    引用格式：徐艳, 陈香嵩, 熊立仲. (2018). 细胞核蛋白分离方法. Bio-101: e1010122. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010122.
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    How to cite: Xu, Y., Chen, X. S. and Xiong, L. Z.  (2018). Nuclear Protein Isolation Protocol. Bio-101: e1010122. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010122.
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    分类

    分子生物学 > 蛋白质 > 分离

    植物科学 > 植物分子生物学 > 蛋白质

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