实验原理:在变性条件下将待检RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,使其按照分子量大小分离。按照同Southern Blot相同的原理进行转膜,并使用探针进行杂交检测。相比RT-PCR等技术,Northern blot具有稳定、可靠、假阳性少等优点。
实验目的:检测样品中某一特定基因mRNA的转录与否
,以及转录的水平。比较两个或两个以上的不同样品中某一基因的转录差异。
材料与试剂
- 进口RNAase free 1.5 ml和0.5 ml管子*
- 进口RNAase free 20 μl、200 μl枪头*
- 转膜盘子
- 玻璃棒
- 玻璃板
- 胶片
- 滤纸
- 洗膜盒
- DEPC水*
*注:需经高温高压灭菌处理。
- Random Primer DNA Labeling Kit Ver 2.0 (TAKARA, catalog number: D6045)
- 琼脂糖
- NaAc
- NaOH (国药试剂)
- EDTA (国药试剂)
- MOPS (上海生工)
- NaH2PO4 (国药试剂)
- H3PO4 (85%,国药试剂)
- NaCl (国药试剂)
- Na3Citrate (柠檬酸三钠,国药试剂)
- SDS (国药试剂)
- Deionized formamide (上海生工)
- 37% formaldehyde (甲醛,国产)
- Glycerol (国产)
- Bromphenol Blue (溴酚蓝,Sigma)
- Xylene Cyanol (二甲苯氰,Sigma)
- 1 M NaAc (pH 7.0) (见溶液配方)
- 4 N NaOH (见溶液配方)
- 0.5 M EDTA (pH 8.0) (见溶液配方)
- 10x MOPS buffer (见溶液配方)
- 1 M NaH2PO4 buffer (pH 7.2) (见溶液配方)
- 20x SSC (见溶液配方)
- 10% SDS (见溶液配方)
- Sample buffer (见溶液配方)
- 转膜缓冲液 (见溶液配方)
- Blue juice (loading buffer) (见溶液配方)
- Hibridization buffer (见溶液配方)
- 洗膜液 (见溶液配方)
- 4x SSC (见溶液配方)
仪器设备
- 烧杯
- 量筒
- 梳子
- 烧瓶
- 灭菌锅
- 电泳槽
- 电泳仪
- 离心机
- 水浴锅
- 通风橱
- 超净工作台
- 摇床
- -20 °C冰箱
- 紫外交联仪
- FLA-5100型荧光/化学发光及同位素影像扫描分析仪
实验步骤
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
分类
分子生物学 > RNA > RNA 检测 > Northern 印迹杂交
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