Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

mRNA反转录

Reverse Transcription of mRNA to cDNA

王 王磊
都 都浩
欧 欧阳亦聃

发表时间: 2018年04月09日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010114 浏览次数: 6509

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实验原理：利用真核生物mRNA的3’端有poly A的特征，可以通过与poly A互补的oligo dT作为引物，在反转录酶的作用，合成cDNA。
实验目的：检测基因的表达模式，以及确定基因的转录方式，扩增基因cDNA，构建cDNA文库及酵母双(单)杂交文库等。

Keywords: mRNA search 反转录 search 基因表达 search

材料与试剂

  1. 0.6 ml及1.5 ml tubes (AXYGEN)
  2. 20 µl、200 µl及1 ml tips (AXYGEN)
  3. 0.5 M EDTA
  4. DEPC (diethyl pyrocarbonate) (Sigma, catalog number: 40718)
  5. ddH2O (DEPC treated and steriled)
  6. DNase I (Amplification Grade, Invitrogen, catalog number: 18068-015)
  7. oligo d(T)15 (Promega, catalog number: C110A)
  8. SSIII DOUBLE STRANDED CDNA SYTH KIT (Invitrogen, catalog number: 18080-044)
  9. RRI (Takara, catalog number: 2313A)
  10. Ubiquitin引物 (F引物: AACCAGCTGAGGCCCAAGA; R引物: ACGATTGATTTAACCAGTCCATGA)

仪器设备

  1. 水浴锅
  2. 离心机
  3. PCR仪
  4. 计时器
  5. 分光光度计 (测量RNA浓度和质量)

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王磊, 都浩, 欧阳亦聃. (2018). mRNA反转录. Bio-101: e1010114. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010114.
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How to cite: Wang, L., Du, H. and Ouyang, Y. D. (2018). Reverse Transcription of mRNA to cDNA. Bio-101: e1010114. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010114.
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分类

分子生物学 > RNA > 返转录

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