Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

水稻组织mRNA分离

mRNA Isolation from Rice Tissues

方 方玉洁
沈 沈建强
熊立仲 熊立仲

发表时间: 2018年04月27日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010112 浏览次数: 3766

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实验原理：真核细胞mRNA最显著特征是具有5’–端帽子结构和3'–端的polyA尾巴。mRNA的polyA与oligo(dT)纤维素柱在高盐下亲和吸附。在低盐下吸附解除，因此可利用该原理分离mRNA，再用有机溶剂沉淀可得纯化mRNA。
实验目的：从水稻组织中分离纯化mRNA，可以用于逆转录，RACE和文库构建等后续实验。

Keywords: 水稻 search mRNA search 分离 search

材料与试剂

    1. 枪头及配套枪头盒：1 ml、200 μl、20 μl (AXYGEN)
    2. 离心管和配套管架：1.5 ml (AXYGEN)
    3. 50 ml离心管：分装氯仿、异丙醇和酒精
    4. 液氮 (湖北省畜牧局制氧厂)
    5. 焦碳酸二乙酯 (DEPC, Sigma, catalog number: D5758)
    6. 苯酚:氯仿:异戊醇 (体积比25:24:1) 或氯仿 (国药试剂，分析纯)
    7. 异丙醇 (国药试剂，分析纯)
    8. 无水乙醇或95%乙醇 (国药试剂，分析纯)
    9. 75%乙醇 (用95%乙醇和0.1‰ DEPC处理过的H2O配制)
    10. TE缓冲液
    11. Tris-HCl
    12. 糖原 (Glycogen)
    13. NaAc
    14. Micro-FastTrackTM 2.0 Kit (Invitrogen, catalog number: K1520-02)
    15. 0.1‰ DEPC处理水 (见溶液配方)

    仪器设备

    1. 研钵和研磨棒
    2. 移液器：1 ml、200 μl、20 μl、10 μl、2.5 μl (Eppendorf)
    3. 试剂瓶：250 ml
    4. 4 °C冷冻离心机 (Eppendorf, model: Centrifuge 5417R)
    5. 紫外分光光度计：Nanodrop (Thermo Fisher)
    6. -80 °C冰箱
    7. 灭菌锅
    8. 计时器
    9. 平板摇床或混悬仪

    实验步骤

    Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
    引用格式：方玉洁, 沈建强, 熊立仲. (2018). 水稻组织mRNA分离. Bio-101: e1010112. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010112.
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    How to cite: Fang, Y. J., Shen, J.Q. and Xiong, L. Z. (2018). mRNA Isolation from Rice Tissues. Bio-101: e1010112. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010112.
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    分类

    分子生物学 > RNA > RNA 提取

    植物科学 > 植物分子生物学 > RNA

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