Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

水稻种子高质量DNA抽提

High-quality DNA Extraction from Rice Seeds

刘 刘菊红
徐 徐艳
熊立仲 熊立仲

发表时间: 2018年05月10日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010103 浏览次数: 7298

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实验原理：水稻种子含有较少量的基因组DNA，为了尽可能多而完整地将其抽提出来，需要加入去污剂SDS裂解细胞，Proteinase K降解蛋白，再用CTAB进行抽提。
实验目的：高质量地抽提水稻种子胚乳中的基因组DNA，可用于基因型鉴定，余下含胚的部分可进行后续发芽实验。若不需要发芽，可抽提整粒种子。

Keywords: 水稻 search 种子 search DNA search

材料与试剂

  1. 2 ml离心管
  2. 刀片 (切种子)
  3. 各种型号枪头 (20 μl，200 μl，1 ml)
  4. 水稻种子
  5. 液氮
  6. CTAB (BBI, catalog number: CB0108)
  7. Tris (BBI, catalog number: TB0194)
  8. HCl (36-38%，分析纯)
  9. SDS (BBI, catalog number: SB0485)
  10. NaCl (BBI, catalog number: SB0476)
  11. EDTA (Sangon, catalog number: E0105)
  12. PVP (polyvinylpyrrolidone), Mr40,000
  13. Proteinase K (Takara, catalog number: D9033)
  14. NaOH (Sigma, catalog number: S8045)
  15. Chloroform (国产，分析纯)
  16. Isoamyl alcohol (国产，分析纯)
  17. Phenol (Sangon, catalog number: PD0419-3)
  18. 95% Ethanol (国产，分析纯)
  19. RNase酶
  20. Extraction buffer (见溶液配方)
  21. 2x CTAB solution (见溶液配方)
  22. 1 M Tris-HCl (pH 8.0) (见溶液配方)
  23. 0.5 M EDTA (pH 8.0) (见溶液配方)

仪器设备

  1. 研钵
  2. 移液枪
  3. 恒温水浴锅
  4. 冷冻离心机 (Backman)

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：刘菊红, 徐艳, 熊立仲. (2018). 水稻种子高质量DNA抽提. Bio-101: e1010103. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010103.
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How to cite: Liu, J. H., Xu, Y. and Xiong, L. Z.  (2018). High-quality DNA Extraction from Rice Seeds. Bio-101: e1010103. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010103.
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分类

分子生物学 > DNA > DNA 提取

植物科学 > 植物分子生物学 > DNA

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