Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

水稻叶片高质量DNA抽提

High-quality DNA Extraction from Rice Leaves

吴 吴昊
陈 陈太钰
林拥军 林拥军
陈 陈浩

发表时间: 2018年06月12日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010102 浏览次数: 7577

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实验原理：植物体内的DNA通常在细胞核中以核蛋白的形式存在，利用阳离子去垢剂CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵) 与剧烈的高低温差破坏细胞膜结构使这些核蛋白释放出来。利用氯仿等有机试剂去除蛋白、多糖、酚类等杂质，且DNA在高盐 (1 M NaCl溶液) 条件下可溶，最后使用高浓度酒精溶液重新沉淀获得高质量的植物基因组DNA。
实验目的：大量提取植物基因组DNA，可用于Southern blot分析，对转基因植株进行外源基因插入拷贝数和整合模式检测等。

Keywords: 总DNA search 大样抽提 search Southern blot search

材料与试剂

  1. 10 ml离心管
  2. 水稻叶片
  3. CTAB粉末 (Bio Basic Inc. GB0308BJ011J)
  4. Tris-HCl, pH 8.0 (进口分装)
  5. EDTA, pH 8.0 (国药)
  6. NaCl (国药集团有限公司，分析纯)
  7. 异戊醇
  8. 液氮
  9. 氯仿/异戊醇 (24:1)
  10. 10% CTAB
  11. RNase
  12. 75%乙醇
  13. 琼脂糖
  14. 1.5х CTAB (见溶液配方)
  15. 10% CTAB (见溶液配方)
  16. 1% CTAB (见溶液配方)
  17. 氯仿/异戊醇24:1 (体积比) (见溶液配方)
  18. 1 M NaCl溶液 (见溶液配方)
  19. TE buffer (见溶液配方)

仪器设备

  1. 水浴锅
  2. 通风橱
  3. 离心机

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：吴昊, 陈太钰, 林拥军, 陈浩. (2018). 水稻叶片高质量DNA抽提. Bio-101: e1010102. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010102.
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How to cite: Wu, H., Chen, T. Y., Lin, Y. J. and Chen, H.  (2018). High-quality DNA Extraction from Rice Leaves. Bio-101: e1010102. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010102.
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分类

分子生物学 > DNA > DNA 提取

植物科学 > 植物分子生物学 > DNA

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